欣梗生技俱樂部

專為提高 DNA 生長而調配的培養基，質粒 (Plasmid) 的生產期可長達22小時以上

無菌包裝，可立即使用。無動物產品配方，使用時只需添加少量抗生素，無需添加額外成分。小量培養至放大發酵均適用。Plasmid+® 液體培養基在室溫下儲存長達 12 個月。

使用者心聲 :

以往培養 250 ml 培養液經 QiagenR Hi-Speed 管柱純化獲得約 1mg/ml。使用 Plasmid+ 後，僅需培養 30 ml，即可獲得 1~1.5mg/ml。(出自 : Lab Manager / Novartis® San Diego)

實驗比較

以LB 與 Plasmid+ 培養四種不同 E. coli constructs。24 小時候，比較不同培養基下，其質體(Plasmid)的產量。如下 :

更多細節

1.   Link

2.  另可參考 搖瓶的小改變，細胞與產物即可倍增 / 提高 E. Coli細胞密度與增進蛋白質表現的關鍵因子

3.  欣梗科技 / www.lefoscience.com / 03-212-6700 / info@lefoscience.com

清洗常有的疑問是 :

確定有洗乾淨嗎 !

泡沫那麼多, 沖也沖不乾淨 !

可使用「速洗」實驗器皿清洗器, 清洗的原理 :

利用集中水柱, 由下往上強力噴刷內部, 污物則順勢排出, 清洗每一器皿只需 3~5 秒時間, 即可有效的清洗乾淨

清洗步驟 

一般清洗 :

1. 實驗器皿先以「實驗器皿洗滌器」簡易沖刷
2. 使用適當清潔液以軟性毛刷刷洗內部(或採用浸泡方式)
3. 最後再以「實驗器皿洗滌器」沖洗與潤洗

使用前潤洗 :

對於清洗後, 晾置過久的器皿, 建議能先以「實驗器皿洗滌器」簡易潤洗, 再進行使用或滅菌處理

適用各種不同器皿

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超越一般的規格 的 數位多功能型蠕動幫浦

​

基本規格 :

• 流量控制範圍 : 0.06 ~ 2,280ml/min
• 顯示螢幕/操控      : 3.5”彩色觸控式螢幕
• 含流量校正 / 時間設定 / 正逆轉切換 / 斷電自動復歸功能      
• 可銜接 外部開關 / 腳踏開關 / 手動開關
• 外接〝秤〞自動定量控制 (選配項目)       
• 程式設定 :
  • 持續單點 rpm / 流量控制
  • 間歇停單點 rpm / 流量控制
  • 可程式30階段式rpm / 流量控制
• 可儲存三組檔案模式

  超越一般的規格，滿足多功能斜槓式用途的需求 :  

操作介面詳細介紹

轉速控制 (rpm)

單點轉速控制 (時間控制 / 持續運轉)

間歇停單點轉速控制

可程式30階段式轉速控制

流量控制 (Flow Rate)

單點流量控制 (時間控制 / 持續運轉)

間歇停單點流量控制

可程式30階段式流量

欣梗科技搬家囉!!

338桃園市蘆竹區長興路一段205巷30號5樓 / 03-212-6700

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隨著Exosome (外泌體)的研究日趨熱門，如何獲得高純度的Exosome(外泌體)，對後續的研究至為重要。當前所採用的方法有超高速離心、密度梯度離心、免疫磁珠、沉澱與試劑盒等。然而以上方法皆有其相當的缺點。

於MDPI的Cells刊載了一篇採用中空纖維膜分離純化Exosomes與以離心方式處理，進行了比較：

樣本個別以不同分離純化方式處理後，進行檢測。所得的幾項分析檢測數據顯示，以中空纖維膜處理Exosomes明顯是優於離心 :

• 以每10^6 細胞為單位，採用中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理，比離心式處理，多了將近 2 個對數 (Figure 1，中空纖維膜其回收率可達 10^10，而離心方式，則為 10^8)
• 另以 100 ml培養基為單位，中空纖維膜處理能獲得的產量大約是離心的 5 倍 (Figure 1)

 Figure 1

• Albumin的移除乾淨程度，以中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理的效率是離心方式的 40 倍 (Figure 2)。

  Figure 2

• 再現性測試，中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 經過三重複測試，其所得的大小分佈結果，大致都能一致 (Figure 3)。且經電顯檢驗，以中空纖維處理後的樣本（Figure 4）相比，離心後的樣本所能觀察得到的少很多。

 Figure 3

 Figure 4

以上所用的相關實驗器材 :

1. 採用SpectrumLabs的Hollow Fiber，以D02-E65U-07-S去除細胞與破裂片的澄清步驟，再以D02-E500-05-S進行透析濃縮純化。
2. 使用設備為KrosFlo Research 2i Tangential Flow Filtration System。
3. 處理方法：樣品為 0.2L 的細胞液。第一步，先將樣本濃縮至 50ml。第二步，再以5倍的 Sucrose Buffer進行置換液體 (Buffer Exchange)。最後再濃縮至 6~9 ml。

綜合討論 :

由以上實驗分析後可得知，中空纖維膜 ( Hollow Fiber )，可將生物檢體，於非常緩和與穩定的條件下，進行快速分離純化出微量的 Exosomes。其再現性極佳，且可將過程線性放大至更大的體積量。

以上資料參考來源 :

Busatto, S. et al., 2018. Tangential flow filtration for highly efficient concentration of extracellular vesicles from large volumes of fluid.

免費索取進一步詳細文章內容

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有下面需求的，或許可立即考慮採用此套工具：

• 希望能有慢或極慢的流量、並能長時間穩定進料，甚至渴望能安穩放到過夜
• 要求高穩定的流量
• 體積要小，希望冰箱的一角能擺的下
• 希望有計量裝置，可設定滴出量，並能自動停止入料
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• 有層析管入料的需求

特色 :

• 採6軸滾輪式蠕動幫浦，輸液穩定度高
• 數位液晶螢幕顯示
• 無段旋鈕式數位rpm控制流量 : 2~300 rpm
• 可選擇「持續累計時間運轉模式」或「計時模式 99hr/59 mins/59 sec」
• 流量範圍：0.05 ~100ml/min (依據三種管徑大小，含蓋三種不同流量範圍)
  • 採用 #13 : 0.05 ~8.75 ml/min
  • 採用 #14 : 0.15 ~ 26.25 ml/min
  • 採用 #16 : 0.57 ~ 100 ml/min
• 可正逆轉切換：順時針和逆時針運轉，切換自如
• 斷電來電自動復歸：因突發停電，當復電後設備可自動重新運轉
• 配有層析管住夾具 
• 可搭配計量秤，設定重量，並自動停機。

(可耐 200 psi 高壓的 open column)

MAP.03-rpm會幫您好好地處理層析入料的工作。

若有更多層析問題，歡迎於部落格留言與我們討論

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KrosFlo® KR2i TFF System 切向流濃縮透析系統

實現真正全自動化濃縮、透析、純化、補液系統
 

桌上型全自動切向流濃縮透析系統，符合cGMP要求，為量產等級的先導測試與線性放大準備之機型，適用Hollow fiber與TFF cassette，組合彈性、操作簡易且自動達到濃縮與透析倍率後停機；全數值與實驗參數自動記錄在Excel中；平板電腦觸控控制並可將電腦遠端移至BSC外使用。

模組化設計，自由搭配配件如:微電腦幫浦、重量停機秤、壓力檢測儀即蛋白質與溫度檢測儀等...

濃縮模式-單幫浦單秤 (左圖)； 濃縮透析補液模式 2-3幫浦雙秤(右圖)

六種自動化模式組合，濃縮、透析、補液自由搭配，到達條件即自動執行下一步指令

C: concentration 濃縮模式

D: dialysis 透析模式(換液模式)

CF: constant feeding 持續饋料模式

Excel即時存取所有數據並自動計算完畢

12種條件記錄
時間 (Time)
入口端壓力 (Inlet pressure)
回流端壓力 (Retentate pressure)
過濾端壓力 (Permeate pressure)
入口流速 (Feed flow rate)
幫浦轉速 (Pump RPM)
幫浦模式 (Pump mode)
過濾流速 (Permeate flow rate)
提醒 (Notes, alarm, process status, functions)
過濾透析流速 (Diafiltration flow rate)
樣品重量 (Feed scale weight)
過濾端重量 (Permeate scale weight)

微電腦蠕動幫浦-標準配備幫浦頭，適用六種矽膠管，隨意搭配，靈活運用

轉速範圍: 0.1~600 rpm 流量範圍: 0.06~2300 ml/min

可更換成附廠幫浦頭，補足其他四種矽膠管大小               

轉速範圍: 0.1~600 rpm 流量範圍: 1.7~2900 ml/min

兩種切向流過濾(Tangential Flow, TFF)皆適用

Hollow fiber 中空纖維膜	TFF cassette 匣式(平板)濾膜

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Tel: 02-28321066
E-mail: info@lefoscience.com

  之前從CAR-T製程過程，從細菌到病毒 (上篇)已介紹含有專一性辨認之基因片段的質體(plasmid)是如何透過細菌複製增量，接下來就是將質體送入T細胞中最終使其表現CAR於細胞表面上，送入方式常見的有電穿孔(electroporation)與病毒感染(virus infection)，前者是在細胞外外加短暫高電壓，使細胞膜通透力暫時性增加來讓外源基因進入細胞中，而本篇將著重於病毒感染法來介紹。

電穿孔原理:

圖片來源: Mol Ther. 2009 May;17(5):922-8.

簡易的病毒感染流程如下:

何謂病毒感染式的基因轉殖呢? 簡單來說就是利用病毒會將自身DNA送到宿主細胞內的特性，將我們的目標基因送到細胞中，再利用細胞本身轉錄轉譯能力將目標基因轉譯成功能性蛋白。

在生物技術上最常使用反轉錄病毒(retrovirus)、腺病毒(adenovirus)和慢病毒(lentivirus)三種來當作我們的基因遞送者:

A: 反轉錄病毒(Retrovirus)

一種RNA病毒，進入宿主後會反轉錄作用將RNA反轉成DNA，並將DNA嵌入宿主染色體中，因此就能藉由宿主複製而複製，具外套膜且只能感染分裂中的細胞。

B: 腺病毒(Adenovirus)

為一種DNA病毒，經用內吞作用(endocytosis)進入宿主細胞中，進入後再釋出其DNA進入宿主細胞核中，不具外套膜但能感染分裂中或不分裂的細胞，腺病毒最後會破宿主細胞膜而出。

C: 慢病毒(Lentivirus)

為一種RNA病毒，屬反轉錄病毒的一種，外套膜表面與宿主細胞膜受體辨認後藉由膜融合(membrane fusion)進入宿主中，但與反轉錄病毒的差別在於其可感染分裂或不分裂的細胞。

以慢病毒為例，為降低基因轉殖操作的危險性，除了目標質體外，通常還有包裹載體(package vector,又稱結構蛋白載體 structure protein vector)及外套膜載體(envelope vector)，將三者一同送入包裹細胞(packaging cell ex:293T)內進行複製、表現與病毒組裝，其經過逆轉錄作用製造載體DNA及轉譯出病毒的蛋白外殼與外套膜，最後於細胞中組裝成病毒型態後再釋放到細胞外。此過程通常需要兩到三天以蒐集足夠量且含有目標質體的病毒。

慢病毒包裝與感染步驟:

將含病毒的培養基收下來後，傳統會使用高速離心的方式分離培養基中的細胞碎屑再以超高速離心來濃縮病毒提高效價，近代則推薦使用Hollow fiber(HF) 0.5, 0.65 μm以切向流過濾的方式做培養液澄清再以300, 500 kD HF做初步濃縮，之後利用層析管柱分離出病毒，再用100, 300 kD HF做最後濃縮以及0.2 µm的無菌過濾，結合上篇所述，不論是在細菌階段或是在細胞的病毒組裝階段都可以用到切向流過濾濃縮系統(Tangential Flow system; TFF)系統來做濃縮、分離、除菌與澄清，只需更換HF與矽膠管件即可。

(參考快速病毒濃縮(無菌操作)的新思維; 不可思議!! 200倍病毒濃縮透析換液僅花35分鐘完成!!)

TFF 切向流過濾系統，從2 mL~500 L

得到濃縮後具有CAR的病毒後，接下來就可以用來感染從病患血液中分離出來的T細胞囉! 步驟如下圖:

結合上下兩篇所述， 要改造T細胞的前置步驟就需經歷: 專一性質體設計、細菌轉殖培養放大、病毒包裝放大、分離濃縮等重重步驟，這樣的演進都是結合眾多科學家們辛苦研究的結晶，才造就人類在醫療技術上的突破，雖然現今CAR-T細胞治療仍有許多副作用與侷限性，不過隨著科學與醫療快速進步，期許未來CAR-T細胞療法能更廣泛的應用與更安全。

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在先前的文章:Hollow Fiber製備CAR-T載體與品質的檢測中，我們介紹到CAR-T的原理與應用，但在使用慢病毒感染T-cell改造成CAR-T前是需要進行重重步驟，本篇將跟各位介紹具有目標基因的病毒是如何被製造，過程又大致可分為細菌培養放大質體(Plasmid)與哺乳細胞培養放大慢病毒(ex: Lentivirus)，放大慢病毒的部分將在下一篇再跟大家介紹。簡易的細菌放大步驟圖如下:

首先將專一性辨認目標物(ex:癌細胞)的基因片段接在載體(Vector)上，稱為基因接合作用(Gene ligation)，而接合後稱為質體(Plasmid)，因載體有供細菌辨認的位置，因此當基因片段送入膜通透力好的細菌(勝任細胞;Competent cell)時，質體可隨著細菌複製並繁衍下去，如此以來質體就能夠被等比放大，此步驟稱為轉形作用(Transformation)。

搭配Ultra yield flask細胞養(氧)量倍增瓶(可參考:搖瓶的小改變，細胞與產物即可倍增; 提高 E. Coli細胞密度與增進蛋白質表現的關鍵因子)與專用透氣蓋(專屬2.5L Ultra Yield 搖瓶的Vented Cap出爐了!!)將細菌置於incubator中震盪培養放大(參考:令人折服的設計：INFORS Multitron震盪培養箱)，若為量產等級，則可選用發酵槽(又稱生物反應器; Bioreactor)做更大量的培養放大。

細菌經震盪培養後，可用中空纖維膜(Hollow fiber; HF) 500/750 kD收菌，之後經過破菌處理，再用HF 2 μm做質體澄清及100/300 kD做質體濃縮，此一系列的收菌、質體澄清與質體濃縮的步驟，都可以透過切向流過濾濃縮系統(Tangential Flow system; TFF)來完成(參考: 出乎意料的快與高效率之細胞分離方法!!; 「濃縮與透析」產程放大！從這二步驟開始……)

Hollow fiber TFF system from small to large volume

得到大量高濃度的質體後，就可進入下一步來製造含有CAR的病毒了!此部分留在下篇再向各位介紹囉!

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Picture resource from GE healthcare handbook

比較 hollow fiber vs cassette membrane 的pressure drop
對於濃縮高濃度單株抗體之影響

目的: 比較此兩種濾膜系統何者濃縮後可得到較高濃度的單株抗體(monoclonal antibody; mAb)。

實驗材料:
mAb: 142 kDa; isoelectric point: 8.16 in 5 mM acetate buffer at pH 5 with 20 mM NaCl

結果:

Figure.1 中空纖維膜比起匣式濾膜有較低的pressure drop

當抗體濃度低於100 g/L，匣式濾膜的filtrate flux較中空纖維膜高，但隨著濃縮抗體的濃度增加，兩者的filtrate flux就會趨近於相等(約在200 g/L mAb時)。然由圖中結果顯示，當抗體濃度達到約>150 g/L，匣式濾膜的pressure drop驟升；而中空纖維膜與匣式濾膜於相同抗體濃度的狀況下，pressure drop皆維持的比匣式濾膜來的低很多，且當pressure drup達到500 kPa時，中空纖維膜可得到較高濃度的抗體(~300 g/L)。
因此當需求濃度愈高，pressure drop就盡可能維持越低狀態，就越有辦法提升樣品濃度。

Figure.2 中空纖維膜長度 vs pressure drop

從Figure.2兩圖可看出，filtrate flux隨著中空纖維膜長度增加(20 cm, 40 cm, 65 cm)，而降低，pressure drop則隨長度增加而增加，這是因為進樣抗體液與膜表面間產生與進樣方向相反的阻力，此阻力會因濾膜長度增加(增加摩擦距離與時間)而增加，進而造成抗體從retentatet端出來時流速下降(壓力下降；pressure drop上升)，切向流速下降也造成filtrate flux的下降，因此長度愈長，濃縮所需時間較久且愈不利高濃度抗體的產生。

總結:

結論:

Picture resource from GE healthcare handbook

由以上結果可看出若想透過濃縮得到相當高濃度的單株抗體，匣式濾膜因為結構的關係，提升抗體濃度有其先天的限制。而中空纖維膜則因樣品流向單純，有利於高濃度樣品的需求。至於長度的部分，選擇較短的中空纖維膜則有利於得到較高濃度的單株抗體。

參考資料: Ultrafiltration of highly concentrated antibody solutions: Experiments and modeling for the effects of module and buffer conditions. ( Biotechnol Prog. 2016 May;32(3):692-701.) 
 

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Repligen Hollow fiber

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歷史上第一個接受CAR-T治療的病人是於2012年一位6歲小女孩艾蜜莉（Emily Whitehead），5年後她的癌症症狀完全消失，艾蜜莉也成為CAR-T療法無窮希望的象徵。於2018 年8月28日，吉利德科學公司（Gilead Science）宣佈以120億美元收購凱特製藥（Kite Pharma）。凱特的股票應聲從$138元上漲到$178。不過一年前，凱特的股價還不到$60元，一年之間漲了3倍。它的震撼性不是因為天價的併購金額，而是這次併購正式開啟了CAR-T癌症免疫療法（Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，簡稱CAR-T）的新紀元。

癌症免疫療法－CAR-T Therapy

我們的身體是由無數的細胞所組成，這些細胞和我們一樣會進行生長和複製，從而修復我們身體損壞的區域，或者使我們生長。正常細胞會有秩序地分裂和繁殖，這樣週而復始的循環就稱為細胞週期 (Cell cycle)，而細胞週期是受到某些基因調控的。

然而當基因損壞時，細胞週期將失控，壞掉的細胞將無限制的不斷繁殖，侵犯周圍組織，甚至取得轉移到身體其他部位的能力，這樣就是我們俗稱的惡性腫瘤/癌症。雖免疫系統是保護人體的第一道防線，但不正常的癌細胞不斷複製的過程中，會透過某些機制，去隱藏癌細胞的特徵，以躲避免疫系統，因此，癌細胞才能如此囂張的在人體內持續繁殖，甚至轉移到其他器官。

T細胞是一種免疫細胞，負責保護身體免於外來病原的攻擊；而身體裡面的T細胞有又分很多種，其中一種名為細胞毒性T細胞(cytotoxic T cell)，它的功能主要是辨識異常的細胞，分泌細胞毒素，並消滅這些細胞。

因此CAR-T療法，簡單來說就是，我們在原本無法辨識癌症的T細胞上，裝上一個名為CAR的雷達。如此一來，經過改造的T細胞就會像導彈一樣，精準的定位癌細胞位置，並將這些癌細胞殺死。

在一般癌症治療的方法相當多，傳統化療的專一性較低，容易傷到其他健康的細胞，造成全身性的副作用，如手術治療、化學治療、放射治療、標靶治療等。。而CAR-T (全名為Chimeric antigen receptor T-cell therapy) 治療是可以精準辨識出癌細胞，並將他殺死。這樣的技術，開啟了細胞療法新的扉頁。將來，面對不同的癌症，只要找出適合的雷達-CAR，我們就能請T細胞代勞，替我們對抗癌症。

CAR-T療法怎麼進行？

CAR-T療法是為自己的免疫細胞-T細胞裝上雷達CAR後，讓他行免疫反應對抗癌症。那實際在臨床上是怎麼執行的呢？首先，醫生會從病患的體內抽取出血液，並將抽取出的血液進行分離，挑選出T細胞。經過改造的T 細胞進行改造，會在細胞表面表現出CAR的結構，當他們成長、擴張到一定的程度後，再輸回病人體內，去對抗癌症。用自己的免疫細胞對抗癌症的優點，就是身體不會有排斥反應，是一項十分個人化的療程。

Hollow Fiber生產大量的載體

Lentiviral Supernatant 生產需於潔淨室的 BSC內進行。大略步驟如下：

1. lentiviral supernatant置備

         使用 T176 Falsk 培養HEK293T，進行二次繼代。細胞數由 80x10^6 擴增至少至 2,829x10^6。之後將細胞轉殖至 CellStack，再進行病毒感染。

2. 初步澄清

          將上清液經 0.45u PVDF 過濾

3. 換液與濃縮

         使用KR2i Tangential Flow System (SpectrumLabs) ，以 500 kDa mPES Hollow Fiber膜進行換液與濃縮。原始體積為 4L，先進行第一步濃縮，再以 2L PBS 進行  換液。最後再濃縮成 100ml

製造批次的品管及出產測試，以及大量生產載體的考量

大量之載體生產，都需用下列或類似方法檢驗下列性質。任何之檢驗都需包括對照組（即為已知量的檢驗）以確保檢驗結果無誤。

1. 純度測試

1.  所得載體之DNA或RNA總量，可用A260／A280。
2. 檢驗DNA之大小，均質性（homogeneity）、構造、是超螺旋（supercoiled）或線性（linear）結構，可用電泳膠片法。
3. 是否被RNA或寄主DNA污染，可用電泳法或E. coli的探針（probe）來檢驗。
4. 是否有蛋白質污染，可用電泳膠片銀染色法（silver stain）。
5. 是否有無感染性（non-infectious）病毒，如空蛋白殼（empty capsids）的污染。
6. 產物中是否含有毒物質。

2. 驗證測試

1.  使用數種限制酶來確認載體之限制酶圖譜。
2. 若在同一設備內製造數種不同的載體，需有可用以分辨不同結構之載體的方法。

3. 安全性測試

1.  嗜氧性(aerobic）及厭氧性（anaerobic）的細菌或真菌的污染檢驗。
2. 若使用的是脊椎動物或昆蟲類的細胞株， 需檢驗是否有黴漿菌（mycoplasma）污染 。
3. 檢驗是否有外來的及有複製能力之病毒的污染。製造載體之來源，常有遭受病毒污染之風險，有時在建構有複製缺陷（replication-defective）之病毒載體時，也可能遭受同類之可複製（replication-competent）病毒之污染，這些可能都需加以檢驗並排除。

4. 活性測試（potency）

1. 在製造過程中要有適當之活性測試方法，若無定量之方法，至少要有定性測試。活性測試主要為測量基因產物的生物活性，而不只是證明其存在。
2. 要測量插入基因的表現能力，可將其轉移感染（transfection）至適宜之細胞內，以證明它可製造有活性的基因產物，並須測量產物活性之敏感度（sensitivity）及專一性（specificity）。

Reference :

1.  改造你的免疫細胞，讓他為你對抗癌症－CAR-T Therapy; H. Spectrum by Jessie Chen Feb. 01, 2018
2. 從科學新知、到創業、到科普 – CAR-T正顛覆癌症醫療，台灣在哪裡？ ; 數位時代  2017.09.20 by 鄭志凱
3. Development of a Novel Anti-CD19 Chimeric Antigen Receptor: A Paradigm for an Affordable CAR T Cell Production at Academic Institutions; Molecular Therapy; Methods & Clinical Development. (https://www.cell.com/molecular-therapy-family/methods/fulltext/S2329-0501(18)30122-0)

關於KR2i Tangential Flow System 全自動濃縮分離系統及Hollow fiber 中空纖維膜，可參考公司連結

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病毒濃縮方法, 有採用傳統透析膜 (Dialysis Mambrane)方式, 最常用的則採用 離心管 (Spin Column). 而最近比較熱門與快速的則是採用 中空纖維膜 (Hollow Fiber) 處理.

Note : Hollow Fiber 可選擇的 MWCO 相當密集且廣泛： 1; 3; 5; 10; 30; 50; 70; 100; 500; 750 kD; 0.1; 0.2; 0.65 u 等等

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濃縮與過濾，二步驟……輕鬆放大製程

古早的過濾與濃縮

古早就有以膜方式進行濃縮的概念。如台灣有名的傳統小吃「紅龜粿」與常見的伴手禮「麻糬」，以前製作方式為利用麻袋（膜），以除去糯米水中的水分。至於製作量的多寡與所需時間長短的拿捏，則僅憑藉著師父個人經驗進行拿捏與判斷。

因應現代產品種類複雜與多樣化

常有客戶來電問「能處一噸的濃縮設備，需多少費用……..」。回答這個問題，事實上非常困難，因為現代產程所需處理的樣品種比傳統複雜、且多樣。產品特性因濃度、黏稠度的高低，都影響著過濾速度與所需花費的時間。較大系統式當然可應付，但需多大才足以應付產程所需呢？

另，也常有客戶會說「濃縮時間長短沒關係…..」。此問題也難以回答，因為中空纖維膜是沒有阻塞的問題，但膜面積卻與過濾效率息息相關。時間一拉長，如處理過程超過四~五小時以上，則產品很容易變質、變性。而多大的系統才能於五小時內完成呢？

可經由科學化二步驟，來評估系統之大小

步驟一： Pore Size與產品穩定度的評估

產品於進行量產前，建議可先取 50~500 ml樣品先進行小量的測試。利用 MicroKros 與 Midikros Hollow Fiber Module，配合 MAP System進行不同Pore Size的效率評估測試。同時檢視樣品於經中空纖維膜處理一段時間後，產品有否因而產生變異。

步驟二：量測Flux Rate與最佳之TMP

當通過步驟一的Pore Size與樣品穩定度測試後，可再利用MiniKros Sampler Hollow Fiber Module進行樣品1~3公升的先導型小量產測試。同時配合 "KR2i TFF System"，讓電腦自動演算出該Pore Size的Flux Rate與最佳之TMP條件。

進行量產系統評估

確定好膜的Pore Size，同時有獲得該Pore Size的Flux Rate與TMP相關條件與數據。此時使用者或業者僅需提供「未來產程所需的處理量」與「擬設定處理時間」，即可利用以上數據來進行合理化的線性放大評估。

優點

獲得高效益，降低成本

沒經過比較縝密的評估，而選用較大系統是可縮短處理時間，但過大的系統將使投資設備成本增加，未來更換所需耗材費用也較高。                                 

提升產品品質，減少時間衝擊

Pore Size的選擇於濃縮分離上是一重要議題。過小Pore Size可提升樣品回收率，但處理時間相對的過長，品質不易掌控。而較大的Pore Size是可縮短處理時間，但是會導致產品回收率降低。

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能讓細胞快樂生長的 Spinner Flask

規格

• PTFE Cap with Silicon Sealed
• Adjustable height stirring rod
• The tod does not go beyond the cap : more space in incubator
• The kit includes a glass flask, a rod with a glass, PTFE palette and a PTFE cap
• Vessel is made by borosilicate glass
•  

Double Arm Spinner Flask

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試試新一代的『福瑪斯達 D2』瑞士環安等級殺菌消毒劑

 一般最範用與耳熟能詳的殺菌劑是 --- 酒精, 只有 75% 酒精具有殺菌功效的原理：

酒精濃度愈高與其殺菌效果並不是成正比。原因是高濃度的酒精，會讓細菌的外殼瞬間凝固，使表面蛋白變性，但酒精也因此沒辦法繼續深入細菌內部了，完全不具穿透力。換言之，菌體內部仍具有活力，無法完整殺死細菌。

經研究，酒精濃度只有於75%下是最適當，於此濃度下，不但可引起蛋白質變性，並具有穿透性特性，深入細菌內部，讓細胞脫水，凝固蛋白質，達到殺菌的效果。

   但酒精殺菌的缺點不得不知：  

•     75%酒精對於腸病毒、諾羅病毒，並無效用。因為這些病毒沒有脂質外殼，或是外殼比較厚，酒精也就無能為力了。
•     刺鼻，刺激皮膚
•     有時會傷害設備材質，如金屬、塑料、橡膠與壓克力等等。
•     於密閉空間噴灑，容易閃燃，密閉操作，極具危險性。

試試「福瑪斯達 D2」瑞士環安等級殺菌消毒劑的效用

• 無臭，不刺鼻，不刺激皮膚。
• 不染色，不會破壞材質
• 可輕易溶解血跡
• 清潔與殺菌任何表面，完全不會傷害設備材質。
• 可中細菌所引起的異味
• 無閃燃問題

殺菌功效

• 對細菌與真菌非常有效。
• 有效對抗Hepatitis B, HIV, Mycobacterium (TB), Rotavirus and Influenza A virus ( H5N1 / H1N1 )

效能與時間

適用

• 手部清潔，不刺激皮膚。
• INFORS Sticky Stuff (可水洗式黏貼板)
• 培養箱與其他設備的清理消毒
• 實驗桌、操作台等清理消毒
• 解剖台與相關器械清理消毒
• 無菌操作台清理消毒
• 無菌室清理消毒

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濕度於二氧化碳培養箱上之重要性探討

基本要求：

二氧化碳培養箱功能乃是模擬生物體內的環境，進行細胞或組織的體外培養。因此培養箱最基本要求需能有穩定的溫度、CO₂（以產生恆定的酸鹼值）與飽和濕度。

控制型態：

目前大多的二氧化碳培養箱於調節控制「溫度」與「CO₂濃度」多屬於『強制調控型』，其回復速度與精準度均可到位。然而濕度則多是採用蒸發水盤式，讓濕度自然上升。並無調控，也沒任何顯式濕度呈現於控制錶上，屬於『自我調控飽和型』。

濕度的『自我調控飽和型』的缺失與影響：

當開啟二氧化碳培養箱取出細胞或組織進行檢測時，此時二氧化碳培養箱內之培環境已經瞬間消失。再度關閉二氧化碳培養箱後，溫度與 CO₂ 濃度可藉由強制控制方式，於短時間內可將溫度與 CO₂ 濃度回至控制點。

但濕度則是利用增濕盤利用自然蒸發作用，進行自我調控飽和方式回至飽和濕度，顯而易見，其恢復速度非常的慢。倘若飽和濕氣再於未能恢復時，又需再次開啟培養箱取樣檢測，此時飽和濕度將再次消失。濕度又得再利用自我蒸發方式重新達飽和溼度。此番來來回回將使培養基水分漸漸散失，培養基濃度因此漸漸提升，甚至有產生過度乾燥的可能，使細胞或組織的滲透壓力大增，導致培養不佳，也使重複性培養無法如預期。

改良方式

- 濕度採用 Innovative 「Direct Steam Humidification」Solution（DSH）強制控制型：

目前最新的方式為採用外掛式加濕器(DSH)。加濕水則儲存於 5或10公升血清瓶內，該儲水瓶預先進行滅菌處理，永遠保持於無菌狀態。培養箱內部則設有一濕度偵測器，當濕度低於設定值時，外掛式加濕器會引進外部無菌水至增濕槽，再由增濕槽進行二次加熱處理，此步驟二次菌水會瞬間蒸發成無菌水氣，引導入至培養箱內。

此方式可讓培養環境，快速恢復至最佳濕度狀態。且水源採用經二次滅菌處理步驟，可讓培養箱永遠保持於極度節淨的狀態。

- 培養箱設有內部強制氣流循環系統 :

增加一組內部氣流循環裝置，可使培養箱溫度、CO₂濃度與濕度迅速達至最佳培養條件。大大降低環境變因所導致對細胞或組織衝擊的因子。

綜合概要

溫度、CO₂ 濃度與濕度為進行細胞或組織體外培養的重要控制條件，彼此關係缺一不可，尤其是濕度控制部分至為重要。濕度的高低，影響了培養基濃度與細胞/組織的耐受度。如何讓培養條件能有所控制、重複，且能實際有所依循，濕度的控制是完全不可忽略的一環。INFORS所設計的 Minitron 與 Multitron Cell 於門開啟關閉後於3分鐘內立即可回復至溫度、CO₂ 與濕度的最佳培養條件。

Find the right CO2 incubator for your lab:

1. http://www.lefoscience.com/products_show.php?show=81
2. http://www.infors-ht.com/index.php/en/products/shakers/incubation-shakers/multitron-cell
3. http://www.infors-ht.com/index.php/en/products/shakers/incubation-shakers/minitron

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二氧化碳培養箱專用之振盪器

全世界最扁型的振盪器(shaker)

優點:

1. 本體高度只有6.5 cm，因此置於細胞培養箱中時，與頂部距離遠，可放入大容量的錐形瓶(flask)。
2. 採磁浮式馬達，穩定度高本體不振動，可長時間使用不產熱。
3. 表面採奈米銀抗菌塗層。
4. Shaker表面採可水洗清潔的強力黏貼板，相較夾式固定器，單位面積下可擺放更多錐形瓶，空間擺放極大化。
5. 磁力外掛式控制器，不必開門即可調整轉速。

詳見影片:

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冷颼颼的天氣，大家都去哪裡跨年呢？

欣梗科技祝各位新的一年，新年快樂，平安幸福！

圖片來源：http://www.123newyear.com/wp-content/uploads/2015/03/new-year-messages-and-sms.jpg

哇!! MAP系統～僅花8分鐘細胞濃縮完畢且恢復力8成以上!!

此實驗目的為利用D系列mPES Microkros Hollow fiber來進行草履蟲(Paramecium)細胞濃縮。原液為50ml濃縮至5ml (10x)，僅花8分鐘而已!!使用MAP系統濃縮不旦省下許多時間，草履蟲細胞的恢復力高達８成以上。所以利用Hollow fiber中空纖維膜，以高流速，低TMP方式進行原生動物細胞濃縮, 可減少對樣品的傷害且花費的時間大幅度降低。

也就是說，當進行量產實驗5000ml時，僅需半天時間即可完成！

http://www.dfiles.me/paramecium-slide-400x.html

透析膜規格：

D02-E750-050-N, 750kD

濃縮系統使用：

有細菌細胞、原生動物細胞濃縮分離的需求?? 歡迎留言或聯絡我們欣梗科技股份有限公司。

使用新型Spectrumlab Perfusion系統!! 樣品不再受剪切力影響!!

KML-100 perfusion 設備系統到台灣囉!! 全台唯一耶!! 在南港所舉辦的發表會也圓滿結束!! 到底何謂Perfusion? 這台系統特色在哪裡呢，請點這裡唷!!

有興趣歡迎留言交流唷！！ 

或連結 台灣代理 欣梗科技