超越一般的規格 的 數位多功能型蠕動幫浦

蠕動幫浦.jpg

基本規格 :

  • 流量控制範圍 : 0.06 ~ 2,280ml/min
  • 顯示螢幕/操控      : 3.5”彩色觸控式螢幕
  • 含流量校正 / 時間設定 / 正逆轉切換 / 斷電自動復歸功能      
  • 可銜接 外部開關 / 腳踏開關 / 手動開關
  • 外接〝秤〞自動定量控制 (選配項目)       
  • 程式設定 :
    • 持續單點 rpm / 流量控制
    • 間歇停單點 rpm / 流量控制
    • 可程式30階段式rpm / 流量控制
  • 可儲存三組檔案模式

 

  超越一般的規格,滿足多功能斜槓式用途的需求 :  

蠕動幫浦應用.jpg

 

 

操作介面詳細介紹

轉速控制 (rpm)

單點轉速控制 (時間控制 / 持續運轉)

蠕動幫浦單點轉速.jpg

間歇停單點轉速控制

蠕動幫浦間歇轉速.jpg

 

可程式30階段式轉速控制

蠕動幫浦多段轉速.jpg

 

流量控制 (Flow Rate)

單點流量控制 (時間控制 / 持續運轉)

蠕動幫浦單點流量.jpg

間歇停單點流量控制

蠕動幫浦間歇流量.jpg

可程式30階段式流量

蠕動幫浦多段流量.jpg

 

 

 

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Hollow Fiber-1.jpg

隨著Exosome (外泌體)的研究日趨熱門,如何獲得高純度的Exosome(外泌體),對後續的研究至為重要。當前所採用的方法有超高速離心、密度梯度離心、免疫磁珠、沉澱與試劑盒等。然而以上方法皆有其相當的缺點。

MDPICells刊載了一篇採用中空纖維膜分離純化Exosomes與以離心方式處理,進行了比較:

 

樣本個別以不同分離純化方式處理後,進行檢測。所得的幾項分析檢測數據顯示,以中空纖維膜處理Exosomes明顯是優於離心 :

  • 以每10^6 細胞為單位,採用中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理,比離心式處理,多了將近 2 個對數 (Figure 1,中空纖維膜其回收率可達 10^10,而離心方式,則為 10^8)
  • 另以 100 ml培養基為單位,中空纖維膜處理能獲得的產量大約是離心的 5 (Figure 1)

Fig-1.jpg Figure 1

  • Albumin的移除乾淨程度,以中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理的效率是離心方式的 40 (Figure 2)

Fig-2.jpg  Figure 2

  • 再現性測試,中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 經過三重複測試,其所得的大小分佈結果,大致都能一致 (Figure 3)。且經電顯檢驗,以中空纖維處理後的樣本(Figure 4)相比,離心後的樣本所能觀察得到的少很多。

Fig-3.jpg Figure 3

Fig-4.jpg Figure 4

 

以上所用的相關實驗器材 :

  1. 採用SpectrumLabsHollow Fiber,以D02-E65U-07-S去除細胞與破裂片的澄清步驟,再以D02-E500-05-S進行透析濃縮純化。
  2. 使用設備為KrosFlo Research 2i Tangential Flow Filtration System
  3. 處理方法:樣品為 0.2L 的細胞液。第一步,先將樣本濃縮至 50ml。第二步,再以5倍的 Sucrose Buffer進行置換液體 (Buffer Exchange)。最後再濃縮至 6~9 ml

 

綜合討論 :

由以上實驗分析後可得知,中空纖維膜 ( Hollow Fiber ),可將生物檢體,於非常緩和與穩定的條件下,進行快速分離純化出微量的 Exosomes。其再現性極佳,且可將過程線性放大至更大的體積量。

MAP.03-TFF.jpg

以上資料參考來源 :

Busatto, S. et al., 2018. Tangential flow filtration for highly efficient concentration of extracellular vesicles from large volumes of fluid.

 

免費索取進一步詳細文章內容

 

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層析幫浦

 

有下面需求的,或許可立即考慮採用此套工具

  • 希望能有慢或極慢的流量、並能長時間穩定進料,甚至渴望能安穩放到過夜
  • 要求高穩定的流量
  • 體積要小,希望冰箱的一角能擺的下
  • 希望有計量裝置,可設定滴出量,並能自動停止入料
  • 經費不是那麼充裕,但規格與品質要求不能降低
  • 有層析管入料的需求

 

特色 :

  • 採6軸滾輪式蠕動幫浦,輸液穩定度高
  • 數位液晶螢幕顯示
  • 無段旋鈕式數位rpm控制流量 : 2~300 rpm
  • 可選擇「持續累計時間運轉模式」或「計時模式 99hr/59 mins/59 sec」
  • 流量範圍:0.05 ~100ml/min (依據三種管徑大小,含蓋三種不同流量範圍)
    • 採用 #13 : 0.05 ~8.75 ml/min
    • 採用 #14 : 0.15 ~ 26.25 ml/min
    • 採用 #16 : 0.57 ~ 100 ml/min
  • 可正逆轉切換:順時針和逆時針運轉,切換自如
  • 斷電來電自動復歸:因突發停電,當復電後設備可自動重新運轉
  • 配有層析管住夾具 
  • 可搭配計量秤,設定重量,並自動停機。

column-hero.jpg

(可耐 200 psi 高壓的 open column)

 

MAP.03-rpm會幫您好好地處理層析入料的工作。

 

 

若有更多層析問題,歡迎於部落格留言與我們討論

02-28321066; info@lefoscience.com

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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Dialysis Tubing.jpg

 

  1. 透析膜種類與價格?

Answer :  透析膜種類繁多,建議可參閱 透析膜選項,或直接來電洽詢 (02-28321066)。

 

  1. 透析膜使用前的前處理方法?

Answer : 透析膜種類有 RC CE膜,方法大致都是先以去離子以上等級的水浸泡 30 分鐘以上,同樣再以去離子以上等級的水沖洗,即可開始使用。另針對微量金屬與硫化物敏感的樣品,則可選擇用已預處理移除微量金屬與硫化物的 Sprctra/Por 7 RC,或是採用 Repligen的特殊清洗劑,以完全移除微量金屬與硫化物。

 

  1. 透析是如何運作的呢? 大概多久可以完成呢?

Answer : 透析乃利用膜濃度差,溶質從高濃度(樣品)擴散穿過透析膜至低濃度的區域(透析溶劑),直到達到濃度的平衡。小溶質穿過膜時,較大的溶質會被阻擋在透析袋內。將透析袋與緩衝液置放於磁力攪拌器上攪拌,每天至少更換四次緩衝液,透析的標準流程大約是1648小時。

Dialysis with Stirrer.jpg

  1. 透析液體積與樣品的比例要多少?

Answer : 大體積的透析液對小分子擴散有較佳的驅動力,我們一般建議緩衝液與樣品的體積比為100:1.

 

  1. 膜孔徑的準確性如何?該如何選擇正確的MWCO透析膜?

Answer : 首先Molecular weight cut-off(MWCO)截流分子量,定義為樣品經過17小時的透析後,能保留90%以上之該樣品的分子量大小,用來當作透析膜孔徑單位,因此所選擇的透析膜孔徑大小應要小於我們所要保留的樣品分子量大小;建議透析膜的MWCO為所要保留的樣品之最大分子量至少小3倍左右,也就是假設最大保留樣品的分子量大小為60 KDa,則可選擇20 KDa以下的膜;而所要保留的溶質與所要分離的物質之間的分子量差距至少要5倍才能達到較有效的分離,否則只能採取其他相關的分離技術如層析或TFF過濾法會較有效果。

 

  1. 哪一種透析膜比較能避免膜與蛋白質結合?

Answer : 每種類型的膜對各種分子表現出不同的親和力。對於球狀蛋白,相對結合親和力是CE <RC,也就是說以CE膜來透析的話較不會吸附球狀蛋白,能達到較高的回收率。

 

  1. 該如何選擇適當的透析夾?

Answer:  首先本公司有SPECTRA/POR(Standard)UNIVERSAL兩種透析夾(參考透析夾產品連結)UNIVERSAL的夾子強度較溫和,SPECTRA/POR的夾子較緊。Standard RC membrane (Spectra/Por® 1-7)Biotech RC是由柔性再生纖維素聚合物所組成,可以適用於任一種透析夾。而Biotech CE是由較堅硬的聚合物所組成,所以需要使用較溫和的UNIVERSAL透析夾。因此若對透析夾的選擇有疑慮,可一致都使用UNIVERSAL透析夾。而透析夾長度應大於透析膜封口寬度約4-10mm

 

  1. 透析膜的效期是多久呢?

Answer : 乾燥包裝的透析膜的效期為5年。濕包裝(0.05% sodium azide solution)膜的效期為3年。

 

  1. 如果膜變乾或凍結,還能使用嗎?

Answer : 如果是濕膜變乾了,會對孔徑造成不良的影響,且膜會變脆並可能洩漏,應丟棄。如果膜凍結,冰晶可能會使膜破裂並引起洩漏。但是,您可以嘗試緩慢升高溫度,直到儲存溶液完全融化,但膜可能會不完整。

 

  1. 透析膜不含內毒素嗎?

Answer : Repligen 所供應之透析膜不含內毒素,僅供實驗用途使用。

 

  1. 若是膜上有摺痕、滾痕或折線,還能正常使用嗎?

Answer : 薄膜上的滾痕或折疊線是不會影響擴散與透析效率的。

 

  1. 為什麼CE膜比RC膜更堅硬和更不透明?

Answer : 由於纖維素酯化物(CE)中的聚合物cross-link形成更堅硬的分子晶格,而再生的纖維素膜(RC)的聚合物則形成較軟的晶格結構。而不透明是與CE膜的孔徑大小有關,孔徑越大,膜越不透明。

 

  1. 透析膜可以用化學的方式或加熱來密封嗎?

Answer : CERC透析膜只能用機械式密封。

 

  1. 處理相同的蛋白質樣品時,Spectra/Por 透析膜可以重複使用嗎?

Answer : 我們不建議重複使用透析膜,因為它們可能會因處理和透析條件(pH,溫度,化學暴露等)而受到污染,並且會改變膜的完整性或引起滲漏,尤其是在拆除和重新封裝時。

 

  1. 關於膜表面積與樣品量是否有經驗法則

Answer : 準則是 膜的表面積 / 體積之比越大,則透析越快,因此若有兩個等長的透析膜,但寬度不同,則較小寬度的透析膜具其表面積/體積比大,因此透析速度快。相對的,較大寬度的透析膜其表面積/體積之比較低,因此透析速度較慢。

 

  1. 透析高鹽濃度樣品時的最佳方法是什麼?

Answer : 高滲透壓效應下容易使膜破裂,因此建議採用漸進式的透析方式,以濃度差為10:1方式更換緩衝液。如欲透析含有5 M NaCl的樣品,就可先以含有500 mM NaCl的緩衝液來進行透析。

 

  1. 透析膜如果用於超濾,可以承受多少壓力?

Answer : 透析膜不適用於壓力過濾,其最大承受壓力為1.5 psi

 

  1. 透析時通常會使用哪些透析液(緩衝液)?

Answer : 一般於生物化學當作緩衝液,如:水 / PBS (Phosphate buffer saline) / TBS (Tris buffered saline) / HEPES / Amino Acid Buffers

 

  1. 可以使用打結的方法來取代透析夾嗎?

Answer : 強烈建議不要在管子上打結。 打結不能有效地防止洩漏。 只有透析夾才能為樣品的安全透析提供足夠的密封。

 

  1. 請問我該如何裁切適當的透析膜長度?

Answer : 參考Spectrum(Repligen)表單中所列出的透析膜管體積/長度比來計算我們所需的透析膜長度。例如:16 mm寬度的膜,體積/長度比為0.79 ml/cm,要能容納5 ml的樣品,我們會需要約6.5 cm長度的透析膜。
然而我們需要預留約10-20 %(至少1 cm) 的長度讓袋口上端留有空氣以增加浮力以及讓透析過程中水分子滲透入膜內而有微膨脹的空間,此外還要再預留頭尾兩端約2公分的長度來置放透析夾.所以總透析膜長約為11.5 cm

換算公式如下:

總長  (樣品體積) / (體積/長度) + (需添加的長度10-20%) + 4 cm

 

有相關進一步問題探討,或欲索取更多透析訊息,歡迎隨時與我們聯繫

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實驗室中常利用培養瓶培養細胞和微生物,而研究人員們該如何提高培養瓶的產量呢?

shake_flask-1024x576.jpg

增加產量之前,要先了解影響產量的原因

 ** 產量不佳的原因:氧氣含量不足、養分不足、培養被中斷及反覆操作實驗 **

量產的關鍵方法:

  1. 選擇培養瓶合適的振幅及轉速 (另可參閱"最人性化的震盪培養箱")
  2. 降低體積以增加氧氣轉換率
  3. 使用特殊的培養瓶 (另可參閱 "提高 E. Coli細胞密度與增進蛋白質表現的關鍵因子")
  4. 足夠的養份
  5. 減少干擾:智慧處理及線上即時監控
  6. 接種(clone)時要小心

 

首先, 選擇培養瓶合適的振幅及轉速,

振幅及轉速對氧氣轉換有很大影響,根據不同狀況調整振幅則能夠提供更好的氧氣轉換率及細胞生長的條件。

一般來說,

25 mL至2 L的培養瓶適用25 mm振幅

2 L至5 L的培養瓶適用50 mm的振幅

微量多孔盤適用3 mm的振幅,轉速約800-1000/min

以微生物(細菌,酵母,真菌)飼養為例:使用25 mm振幅,轉速約120-400/min(300/min最佳)speed-conversion-chart.jpg

 

 

接著是降低培養體積以增加氧氣轉換率

培養瓶中的氧氣轉換率通常遠低於發酵槽,傳統做法為使用培養瓶中20-25%的體積空間培養,主要有利於生產生物有機物質、低耗氧生物及生長速率較慢之培養物,但可能會降低氧氣轉換率而不利於細胞生長。

若實驗方法並無限制生長條件,確保最大的液/氣界面的面積以利培養瓶中的氧氣和二氧化碳交換才能提高產量。

將培養量減少到培養瓶體積的10%,轉動時液體會均勻分布於瓶壁,增加液/氣界面的面積而提高氧氣轉換率。

 

使用特殊的培養瓶也能使產量提高,

常見的錐形瓶表面光滑,能使液體於瓶中均勻混合,但不利於氧氣交換,故並非專門作為培養之容器。

特殊設計的培養瓶如Fernbach,其瓶底擋板的作用與發酵槽中的擋板相同,能在培養瓶底端型成湍流區域擾亂液體培養物的平穩流動而改善了氣體傳輸,甚至使培養瓶利於動物細胞培養。

Thomson Optimum Growth養瓶是更專業的容器,有獨特的設計及擋板,適用於哺乳動物、昆蟲和微生物細胞,且能利用培養瓶中60%的體積空間培養,提高產量。而為了增加產量及符合此培養瓶的特性,需有特殊的培養空間及shaker配合。

Minitron_2er_Bedienung-378_web-1024x683.jpg

 

足夠的養份也是量產的重要條件,

細胞生長狀況受多種因素影響,故無法僅依靠改善氧氣轉換率去增加細胞的生長,如碳源耗盡時,無論有多少氧氣,細胞都不會達到更高的密度。因此,培養液及營養添加劑的選擇非常重要。

建議培養液中要有:基質(碳來源)、氮來源、外加微量元素和維生素、緩衝液(維持理想pH值)

基質濃度過高會抑制細胞生長,培養初期不宜將大量基質(如葡萄糖)加入培養瓶中,而是要透過定時投放基質來維持細胞生長。

在培養瓶中加入基質可透過手動及自動,而使用aquila biolabs LIS(液體注射系統)能簡化一系列補充基質的過程,不中斷培養且省時省力。

 

此外,利用智慧處理及線上即時監控減少培養時的干擾也能讓產量提升,

開啟培養箱取出培養瓶時會造成熱能流失及中斷晃動,可能會破壞細胞正常的生長曲線而影響實驗,因此應避免重複開門或長時間取出燒瓶

減輕影響的方法:快速停止並重新啟動(減少停機時間)、使環境快速回到設定狀態、自動進料、線上即時監控

研究所需的監測數據通常要透過取樣,且無法從單一培養瓶獲得,而取樣會破壞最佳的生長環境且容易有人為錯誤,如分析錯誤或數據遺漏,這些都會對實驗結果造成負面影響。

aquila biolabs CGQ (Cell Growth Quantifier) 可以在不影響樣本的狀況下準確、連續地測量培養瓶中的生物質濃度,且能同時測量多個培養瓶。

MUT4_1ner_Aquilia-775_2-1024x662.jpg

最後則是減少培養物本身的影響,

細胞株必須搭配正確的培養基類型,且本身能夠使用培養瓶進行培養(不受剪切力影響),

為了使細胞快速生長,必須使用處於對數生長期且新鮮的細胞株

MUT4_3er_links_Personen-184-1024x683.jpg

 

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INFORS HT Multitron & Minitron shaking incubator 震盪培養箱

專為懸浮式細胞(Cells)、微生物(Microorganisms)、光合生物(Phototrophic organisms)
培養設計之震盪培養箱

Multitron %26; minitron.jpg

 

您是否還在克難的把shaker擺進incubator內培養CHO、293E細胞或是細菌E-coli?

缺點如下:

1.shaker本體占空間: 高度變低,同時浪費旁邊空隙空間 (若為底部水盆式的培養箱,還需再墊高)

2.瓶子擺放需對稱: 多數為單中軸shaker,若擺放不平衡易造成中軸歪斜損壞或攪拌不均

3.噪音: 部分shaker運轉聲較大

4.易產熱: 部分shaker長時間運作易產熱造成培養箱內部溫度不均

5.需開門才可調整轉速: 頻繁開關門導致溫度、濕度與CO2濃度時常變化,對培養較不佳

6.Shaker忘了開或斷電停止而不自知: 易造成整批培養生物的損失

   

外加shaker,空間利用度差Shaker in incubator .jpg

 

INFORS HT shaking incubator 將shaker與培養箱一體化,將以上缺點化為優點:

 

minitron shaker bottom.JPG

五軸shaker超平衡,易拆易清潔

    

1.shaker高度低: 內部擺瓶空間更寬廣,可放5 L錐形瓶

2.五軸磁力shaker驅動: 不需刻意對稱擺放也能維持平衡搖擺

3.shaker運轉安靜

4.shaker長時間運作不易產熱

5.門外轉速控制: 調整轉速不需開關門

6.開關門,shaker自動關開機: 安全不怕忘記開shaker

 

除了以上優點解決外加shaker的不便外,INFORS HT還貼心設計了:
 

1.可連網監控: 透過網路即時得知機台狀況,也可加設警報器

2.活動式承載盤: 承載盤可從培養箱拉出,不必伸手到內部即可拿到後端瓶子

3.易拆洗清潔: shaker可拆卸,底部圓角好洗不藏汙,玻璃門易擦拭

4.外掛蒸氣式加濕: 水瓶於箱外好觀察水量、密閉無菌並以微電腦控制內部濕度以達濕度均衡,解決傳統水盤蒸發式的濕度分佈不均、易發霉與需時常開門觀察水量的缺點

5.功能擴充性高: 可配合各種培養條件調整參數如:製冷、CO2濃度、濕度、進氣、厭氧、遮光、光照強度

6.培養箱直接堆疊: 同機型可直接兩層(Minitron)或三層(Multitron)疊放,中間不必訂製支架分隔

7.最高高度適宜: 最高三層堆疊(Multitron)承載盤僅140 cm,最高把手高度為186 cm,適用多數成人使用者

8.雙層玻璃門: 良好的隔熱與透光且平整表面易清潔

9.UV空氣殺菌(選配): 維持箱內無菌環境 (UV燈管隔絕不影響培養物)

與門一體成型操作面板

minitron control.JPG

 

乙太網路接口

LAN.JPG

 

 

搭配Sticky stuff 水洗式黏貼板,空間利用最大化!!

sticky stuff.JPG

黏貼板,自由拼貼

sticky stuff-2.JPG

隨易黏,不挑瓶,排列緊密省空間

 

01.JPG

minitron 2 layers with people.JPG

Multitron 3層疊放 (下掀門)

Minitron 2層疊放 (側掀門)


 

規格比較表:

  Multitron Minitron
Dimensions
(W x D x H)
1070 mm x 880 mm x 695 mm (one unit) / 1070 mm x 880 mm x 1850 mm (three units) 800 mm x 625 mm x 700 mm (one unit) / 800 x 625 x 1490 mm (two units)
Maximum working height 585 mm (one unit) / 1400 mm (three units) 173 mm (one unit) / 960 mm (two units)
Number of batches 7680 per unit 105 per unit
Volume 21 L per unit 9 L per unit
Maximum load 55 kg per unit 12 kg per unit
Maximum expansion Up to 3 units can be stacked Up to 2 units can be stacked
Rotation speed 20–400 min-1 (3mm: 1'000 min-1) depending on load and stacking 20–400 min-1 depending on load and stacking
Shaking throw 3 mm / 25 mm / 50 mm / adjustable  25 mm / 50 mm
Temperature without cooling max. 10 °C above AT to 65 °C Minimum temperature from 4 °C depending on cooling system 5 °C above ambient temperature to 65 °C 16 °C below AT to 65 °C with cooling; Minimum temperature 4 ° C
Standard parameters Temperature, rotation speed, timer
Optional parameters Cooling, humidity, CO2, light intensity
Ambient humidity (rH) Up to 85 % non-condensing
Power supply 115/230 V ± 10%, 50/60 Hz

 

 

 

若有更多培養問題,歡迎於部落格留言與我們討論,或參考

INFORS HT 台灣代理 欣梗科技股份有限公司logo.jpg
Tel: 02-28321066
E-mail: info@lefoscience.com

 

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KrosFlo® KR2i TFF System 切向流濃縮透析系統

實現真正全自動化濃縮、透析、純化、補液系統
 

KR2i TFF 全自動濃縮透析系統with KONDUiT.jpg

 

桌上型全自動切向流濃縮透析系統,符合cGMP要求,為量產等級的先導測試與線性放大準備之機型,適用Hollow fiber與TFF cassette,組合彈性、操作簡易且自動達到濃縮與透析倍率後停機;全數值與實驗參數自動記錄在Excel中;平板電腦觸控控制並可將電腦遠端移至BSC外使用。

 

Principle of KR2i TFF system.gif

 

 

模組化設計自由搭配配件如:微電腦幫浦、重量停機秤、壓力檢測儀即蛋白質與溫度檢測儀等...

 

濃縮模式-單幫浦單秤 (左圖); 濃縮透析補液模式 2-3幫浦雙秤(右圖)

KR2i TFF system 2 mode.JPG

 

 

六種自動化模式組合濃縮、透析、補液自由搭配,到達條件即自動執行下一步指令

KR2i TFF 6 mode map.jpg

C: concentration 濃縮模式

D: dialysis 透析模式(換液模式)

CF: constant feeding 持續饋料模式

 

 

Excel即時存取所有數據並自動計算完畢

12種條件記錄
 
in Excel.jpg
  • 時間 (Time)
  • 入口端壓力 (Inlet pressure)
  • 回流端壓力 (Retentate pressure)
  • 過濾端壓力 (Permeate pressure)
  • 入口流速 (Feed flow rate)
  • 幫浦轉速 (Pump RPM)
  • 幫浦模式 (Pump mode)
  • 過濾流速 (Permeate flow rate)
  • 提醒 (Notes, alarm, process status, functions)
  • 過濾透析流速 (Diafiltration flow rate)
  • 樣品重量 (Feed scale weight)
  • 過濾端重量 (Permeate scale weight)

 

03.JPG

 

自動計算8種參數
 

  • 穿膜壓力 (Transmembrane pressure; TMP)
  • 過濾流速 (Permeate flow rate)
  • 回流流速 (Retentate flow rate)
  • 流量 (Flux)
  • 壓降 (Pressure drop; ΔP
  • 容積通過量 (Volumetric throughput; VT)
  • 濃縮因子 (Concentration factor)
  • 剪切力 (Shear)

 

04.JPG

 

 

微電腦蠕動幫浦-標準配備幫浦頭,適用六種矽膠管,隨意搭配,靈活運用

Peristaltic pump KR1_Angle.jpg

轉速範圍: 0.1~600 rpm

流量範圍: 0.06~2300 ml/min

 

Tubing size L/S 13 L/S 14 L/S 16 L/S 25 L/S 17 L/S 18
Inner diameter 0.8 mm (0.03") 1.6 mm (0.06") 3.1 mm (0.12") 4.8 mm (0.19") 6.4 mm (0.25") 7.9 mm (0.31")
Hose barb size 1.6 mm (1/16") 1.6 mm (1/16") 3.2 mm (1/8") 4.8 mm (3/16") 6.4 mm (1/4") 9.5 mm (3/8")
Flow range
(approximate)
0.06 to 36 ml/min 0.21 to 130 ml/min 0.8 to 480 ml/min 1.7 to 1000 ml/min 2.8 to 1700 ml/min 3.8 to 2300 ml/min
Compatible pump head

Compatible pump head.JPG

 

可更換成附廠幫浦頭,補足其他四種矽膠管大小               

masterflex-7720062-easy-load-ii-head-for-high-performance-tubing-pps-ss-7720062.jpg

轉速範圍: 0.1~600 rpm

流量範圍: 1.7~2900 ml/min

               

 

Tubing size L/S 15 L/S 24 L/S 35 L/S 36
Inner diameter 4.8 mm (0.19") 6.4 mm (0.25") 7.9 mm (0.31") 9.7 mm (0.38")
Hose barb size 4.8 mm (3/16") 6.4 mm (1/4") 9.5 mm (3/8") 9.5 mm (3/8")
Flow range
(approximate)
1.7 to 1000 ml/min
(1.8 to 1000 ml/min)
2.8 to 1700 ml/min
(3.0 to 1800 ml/min)
3.8 to 2300 ml/min
(4.3 to 2600 ml/min)
4.8 to 2900 ml/min
(5.8 to 3400 ml/min)
Compatible pump head

Compatible pump head-2.JPG

 

 

 

自動背壓調節裝置,隨時調節壓力至最佳狀態

Back pressure control valve.JPG

 

 

 

KONDUiT add-on monitor

KONDUiT.jpg

即時監測電導率,UV和溫度

Conductivity:   0.1 to 100 mS/cm
Temperature:  0-70°
Pressure:         up to 75 psi (5 bar)

 

 

兩種切向流過濾(Tangential Flow, TFF)皆適用

Hollow fiber 中空纖維膜 TFF cassette 匣式(平板)濾膜
Spectrum Repligen hollow fiber  for KR2i.JPG TangenX™ PRO Reusable TFF Cassettes.jpg

 

 

 

若有更多濃縮透析問題,歡迎於部落格留言與我們討論,或參考

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Tel: 02-28321066
E-mail: info@lefoscience.com

 

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SpectraFlo™ Dynamic Dialysis Systems 動態透析系統

大體積的溫和透析法~

SpectraFlo dialysis system2.JPG

 

生技醫療產業常用的透析方式是將不穩定或黏滯性高的物質以透析袋(半透膜)隔離並利用濃度差的方式達到去除鹽份、少量有機溶劑、小分子物質或雜質。相關原理請參考:最新透析的技術與應用

透析袋使用示意:

 


一般以透析袋透析需耗費兩天兩夜且總共需更換8-10次不等的透析液才可達到最佳的透析效果,但面對大量的樣品,除了需要又大又長的透析袋裝填外,更需要更大容器的透析桶來承載透析袋與透析液。

 

大體積透析比較,以200 ml為例:

 

傳統透析法

動態透析系統
 

02.JPG

01.JPG

空間 至少需20 L透析桶 只需2.2 L 透析柱,底座直徑僅30.5 cm
外液處理 抬起傾倒,費力 蠕動幫浦使用,省力
環境 開放式,需頻繁移動透析袋至新的透析桶中 封閉式,不需移動透析袋,較無汙染
擾流方式 磁石攪拌 流動式,可直接排放掉或循環式
濃度差 隨透析時間越久濃度差越低 一直保持高濃度差
多工性 通常一桶一袋-若一桶多放,則不能攪拌,否則易攪纏在一起 透析柱中可加上隔板,同時一柱兩袋,或串聯式透析
效率 1-2天,耗時 <1天,省時

 

使用Spectrum/Repligen的動態透析系統,因搭配蠕動幫浦自動補液換液,膜內外維持高濃度差,達到高效率透析!

Dynamic dialysis system.jpg

 

動態透析示意:

 

兩小時後,左圖靜置方式,外液呈現淡粉紅色,濃度差低;反之右圖動態透析,外液澄清無色,濃度差高

Static VS dynamic dialysis.JPG

 

一小時後,動態透析效率比靜置方式快上 10 %

Static VS dynamic dialysis-2.JPG

 

增加透析液流動速率(Flux rate),透析效果更好!

dynamic dialysis with different flow rate-2.JPG

 

也可使用串聯透析方式同時處理多個透析袋

Series Operation - SpectraFlo™ Process System .JPG

 

多種大小管柱選擇,單柱樣品體積最大可達 2 公升!

SpectraFlo™ Dynamic Dialysis with different size tank.jpg

 

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CAR-T病毒10倍濃縮只要30分鐘!

取代離心式濃縮,以Hollow fiber中空纖維膜做切向流(tangential flow/cross flow)濃縮,省時有效率,高達95 % 以上樣品回收率!

mini TFF 切向流過濾系統 MAP.03 sytem

 

MAP.03 mini TFF system.png

 

實驗目的: 將原50 ml含有CAR-T之病毒培養液濃縮至5 ml

實驗方法: 以Spectrum_Repligen hollow fiber (C02-E300-05-N)並搭配迷你幫浦MAP.03做過濾濃縮

20190815_152449.jpg

整組Hollow fiber與連通管路以gamma ray無菌處理並於無菌操作台中操作使用,免去0.22 um過濾除菌!

 

 

  濃縮大車拼
  Hollow fiber 切向流 傳統離心
裝置圖

MAP.03 mini TFF system.JPG

spin column.jpg

原理

樣品流向平行濾膜,不易堵塞

Cross Flow.jpg

樣品流向垂直濾膜,易堵塞

Dead End.jpg

50 cc
10倍濃縮時間
約30 min 需分裝離心 15 cc/tube >1 hr
回收率 >95 % 易沾黏在膜上,回收率較差

 

迷你輕巧! 冰箱中4度C 自動操作、自動停機也OK!!

20190816_105845.jpg

 

 

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  之前從CAR-T製程過程,從細菌到病毒 (上篇)已介紹含有專一性辨認之基因片段的質體(plasmid)是如何透過細菌複製增量,接下來就是將質體送入T細胞中最終使其表現CAR於細胞表面上,送入方式常見的有電穿孔(electroporation)與病毒感染(virus infection),前者是在細胞外外加短暫高電壓,使細胞膜通透力暫時性增加來讓外源基因進入細胞中,而本篇將著重於病毒感染法來介紹。

 

電穿孔原理:

electroporation.jpg

圖片來源: Mol Ther. 2009 May;17(5):922-8.

 

簡易的病毒感染流程如下:

 

CAR-T process 2.jpg

 

何謂病毒感染式的基因轉殖呢? 簡單來說就是利用病毒會將自身DNA送到宿主細胞內的特性,將我們的目標基因送到細胞中,再利用細胞本身轉錄轉譯能力將目標基因轉譯成功能性蛋白。

在生物技術上最常使用反轉錄病毒(retrovirus)、腺病毒(adenovirus)和慢病毒(lentivirus)三種來當作我們的基因遞送者:

 

A: 反轉錄病毒(Retrovirus)

一種RNA病毒,進入宿主後會反轉錄作用將RNA反轉成DNA,並將DNA嵌入宿主染色體中,因此就能藉由宿主複製而複製,具外套膜且只能感染分裂中的細胞

 

B: 腺病毒(Adenovirus)

為一種DNA病毒,經用內吞作用(endocytosis)進入宿主細胞中,進入後再釋出其DNA進入宿主細胞核中,不具外套膜但能感染分裂中或不分裂的細胞,腺病毒最後會破宿主細胞膜而出。

 

C: 慢病毒(Lentivirus)

為一種RNA病毒,屬反轉錄病毒的一種,外套膜表面與宿主細胞膜受體辨認後藉由膜融合(membrane fusion)進入宿主中,但與反轉錄病毒的差別在於其可感染分裂或不分裂的細胞

 

以慢病毒為例,為降低基因轉殖操作的危險性,除了目標質體外,通常還有包裹載體(package vector,又稱結構蛋白載體 structure protein vector)及外套膜載體(envelope vector),將三者一同送入包裹細胞(packaging cell ex:293T)內進行複製、表現與病毒組裝,其經過逆轉錄作用製造載體DNA及轉譯出病毒的蛋白外殼與外套膜,最後於細胞中組裝成病毒型態後再釋放到細胞外。此過程通常需要兩到三天以蒐集足夠量且含有目標質體的病毒。

 

慢病毒包裝與感染步驟:

lentivirus-production-mirus-bio-recombinant.png

 

將含病毒的培養基收下來後,傳統會使用高速離心的方式分離培養基中的細胞碎屑再以超高速離心來濃縮病毒提高效價,近代則推薦使用Hollow fiber(HF) 0.5, 0.65 μm以切向流過濾的方式做培養液澄清再以300, 500 kD HF做初步濃縮,之後利用層析管柱分離出病毒,再用100, 300 kD HF做最後濃縮以及0.2 µm的無菌過濾,結合上篇所述,不論是在細菌階段或是在細胞的病毒組裝階段都可以用到切向流過濾濃縮系統(Tangential Flow system; TFF)系統來做濃縮、分離、除菌與澄清,只需更換HF與矽膠管件即可。

(參考快速病毒濃縮(無菌操作)的新思維; 不可思議!! 200倍病毒濃縮透析換液僅花35分鐘完成!!)

 

TFF 切向流過濾系統,從2 mL~500 L

Tangential Flow TFF system-2.jpg

 

得到濃縮後具有CAR的病毒後,接下來就可以用來感染從病患血液中分離出來的T細胞囉! 步驟如下圖:

 

CAR-T.jpg

 

結合上下兩篇所述, 要改造T細胞的前置步驟就需經歷: 專一性質體設計、細菌轉殖培養放大、病毒包裝放大、分離濃縮等重重步驟,這樣的演進都是結合眾多科學家們辛苦研究的結晶,才造就人類在醫療技術上的突破,雖然現今CAR-T細胞治療仍有許多副作用與侷限性,不過隨著科學與醫療快速進步,期許未來CAR-T細胞療法能更廣泛的應用與更安全。

 

 

 

 

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