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隨著Exosome (外泌體)的研究日趨熱門，如何獲得高純度的Exosome(外泌體)，對後續的研究至為重要。當前所採用的方法有超高速離心、密度梯度離心、免疫磁珠、沉澱與試劑盒等。然而以上方法皆有其相當的缺點。

於MDPI的Cells刊載了一篇採用中空纖維膜分離純化Exosomes與以離心方式處理，進行了比較：

樣本個別以不同分離純化方式處理後，進行檢測。所得的幾項分析檢測數據顯示，以中空纖維膜處理Exosomes明顯是優於離心 :

• 以每10^6 細胞為單位，採用中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理，比離心式處理，多了將近 2 個對數 (Figure 1，中空纖維膜其回收率可達 10^10，而離心方式，則為 10^8)
• 另以 100 ml培養基為單位，中空纖維膜處理能獲得的產量大約是離心的 5 倍 (Figure 1)

 Figure 1

• Albumin的移除乾淨程度，以中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理的效率是離心方式的 40 倍 (Figure 2)。

  Figure 2

• 再現性測試，中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 經過三重複測試，其所得的大小分佈結果，大致都能一致 (Figure 3)。且經電顯檢驗，以中空纖維處理後的樣本（Figure 4）相比，離心後的樣本所能觀察得到的少很多。

 Figure 3

 Figure 4

以上所用的相關實驗器材 :

1. 採用SpectrumLabs的Hollow Fiber，以D02-E65U-07-S去除細胞與破裂片的澄清步驟，再以D02-E500-05-S進行透析濃縮純化。
2. 使用設備為KrosFlo Research 2i Tangential Flow Filtration System。
3. 處理方法：樣品為 0.2L 的細胞液。第一步，先將樣本濃縮至 50ml。第二步，再以5倍的 Sucrose Buffer進行置換液體 (Buffer Exchange)。最後再濃縮至 6~9 ml。

綜合討論 :

由以上實驗分析後可得知，中空纖維膜 ( Hollow Fiber )，可將生物檢體，於非常緩和與穩定的條件下，進行快速分離純化出微量的 Exosomes。其再現性極佳，且可將過程線性放大至更大的體積量。

以上資料參考來源 :

Busatto, S. et al., 2018. Tangential flow filtration for highly efficient concentration of extracellular vesicles from large volumes of fluid.

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