cross flow.jpg

 


歷史上第一個接受CAR-T治療的病人是於2012年一位6歲小女孩艾蜜莉(Emily Whitehead5年後她的癌症症狀完全消失,艾蜜莉也成為CAR-T療法無窮希望的象徵。於2018 828日,吉利德科學公司(Gilead Science)宣佈以120億美元收購凱特製藥(Kite Pharma)。凱特的股票應聲從$138元上漲到$178。不過一年前,凱特的股價還不到$60元,一年之間漲了3倍。它的震撼性不是因為天價的併購金額,而是這次併購正式開啟了CAR-T癌症免疫療法(Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy,簡稱CAR-T)的新紀元。

 

癌症免疫療法-CAR-T Therapy

我們的身體是由無數的細胞所組成,這些細胞和我們一樣會進行生長和複製,從而修復我們身體損壞的區域,或者使我們生長。正常細胞會有秩序地分裂和繁殖,這樣週而復始的循環就稱為細胞週期 (Cell cycle),而細胞週期是受到某些基因調控的。

然而當基因損壞時,細胞週期將失控,壞掉的細胞將無限制的不斷繁殖,侵犯周圍組織,甚至取得轉移到身體其他部位的能力,這樣就是我們俗稱的惡性腫瘤/癌症。雖免疫系統是保護人體的第一道防線,但不正常的癌細胞不斷複製的過程中,會透過某些機制,去隱藏癌細胞的特徵,以躲避免疫系統,因此,癌細胞才能如此囂張的在人體內持續繁殖,甚至轉移到其他器官。

T細胞是一種免疫細胞,負責保護身體免於外來病原的攻擊;而身體裡面的T細胞有又分很多種,其中一種名為細胞毒性T細胞(cytotoxic T cell),它的功能主要是辨識異常的細胞,分泌細胞毒素,並消滅這些細胞。

因此CAR-T療法,簡單來說就是,我們在原本無法辨識癌症的T細胞上,裝上一個名為CAR的雷達。如此一來,經過改造的T細胞就會像導彈一樣,精準的定位癌細胞位置,並將這些癌細胞殺死。

在一般癌症治療的方法相當多,傳統化療的專一性較低,容易傷到其他健康的細胞,造成全身性的副作用,如手術治療、化學治療、放射治療、標靶治療等。。而CAR-T (全名為Chimeric antigen receptor T-cell therapy) 治療是可以精準辨識出癌細胞,並將他殺死。這樣的技術,開啟了細胞療法新的扉頁。將來,面對不同的癌症,只要找出適合的雷達-CAR,我們就能請T細胞代勞,替我們對抗癌症。

 

CAR-T療法怎麼進行?

CAR-T療法是為自己的免疫細胞-T細胞裝上雷達CAR後,讓他行免疫反應對抗癌症。那實際在臨床上是怎麼執行的呢?首先,醫生會從病患的體內抽取出血液,並將抽取出的血液進行分離,挑選出T細胞。經過改造的T 細胞進行改造,會在細胞表面表現出CAR的結構,當他們成長、擴張到一定的程度後,再輸回病人體內,去對抗癌症。用自己的免疫細胞對抗癌症的優點,就是身體不會有排斥反應,是一項十分個人化的療程。

CAR-T-1.jpg

 


Hollow Fiber生產大量的載體

Lentiviral Supernatant 生產需於潔淨室的 BSC內進行。大略步驟如下:

  1. lentiviral supernatant置備

          使用 T176 Falsk 培養HEK293T,進行二次繼代。細胞數由 80x10^6 擴增至少至 2,829x10^6。之後將細胞轉殖至 CellStack,再進行病毒感染。

  2. 初步澄清

           將上清液經 0.45u PVDF 過濾

  3. 換液與濃縮

          使用KR2i Tangentail Flow System (SpectrumLabs) ,以 500 kDa mPES Hollow Fiber膜進行換液與濃縮。原始體積為 4L,先進行第一步濃縮,再以 2L PBS 進行  換液。最後再濃縮成 100ml

virus production.jpg

 


製造批次的品管及出產測試,以及大量生產載體的考量

大量之載體生產,都需用下列或類似方法檢驗下列性質。任何之檢驗都需包括對照組(即為已知量的檢驗)以確保檢驗結果無誤。

1. 純度測試

  1.  所得載體之DNARNA總量,可用A260A280
  2. 檢驗DNA之大小,均質性(homogeneity)、構造、是超螺旋(supercoiled)或線性(linear)結構,可用電泳膠片法。
  3. 是否被RNA或寄主DNA污染,可用電泳法或E. coli的探針(probe)來檢驗。
  4. 是否有蛋白質污染,可用電泳膠片銀染色法(silver stain)。
  5. 是否有無感染性(non-infectious)病毒,如空蛋白殼(empty capsids)的污染。
  6. 產物中是否含有毒物質。

 

2. 驗證測試

  1.  使用數種限制酶來確認載體之限制酶圖譜。
  2. 若在同一設備內製造數種不同的載體,需有可用以分辨不同結構之載體的方法

 

3. 安全性測試

  1.  嗜氧性(aerobic)及厭氧性(anaerobic)的細菌或真菌的污染檢驗。
  2. 若使用的是脊椎動物或昆蟲類的細胞株, 需檢驗是否有黴漿菌(mycoplasma)污染
  3. 檢驗是否有外來的及有複製能力之病毒的污染。製造載體之來源,常有遭受病毒污染之風險,有時在建構有複製缺陷(replication-defective)之病毒載體時,也可能遭受同類之可複製(replication-competent)病毒之污染,這些可能都需加以檢驗並排除。

 

4. 活性測試(potency

  1. 在製造過程中要有適當之活性測試方法,若無定量之方法,至少要有定性測試。活性測試主要為測量基因產物的生物活性,而不只是證明其存在。
  2. 要測量插入基因的表現能力,可將其轉移感染(transfection)至適宜之細胞內,以證明它可製造有活性的基因產物,並須測量產物活性之敏感度sensitivity)及專一性(specificity)。

 

Reference :

  1.  改造你的免疫細胞,讓他為你對抗癌症-CAR-T Therapy; H. Spectrum by Jessie Chen Feb. 01, 2018
  2. 從科學新知、到創業、到科普 – CAR-T正顛覆癌症醫療,台灣在哪裡? ; 數位時代  2017.09.20 by 鄭志凱
  3. Development of a Novel Anti-CD19 Chimeric Antigen Receptor: A Paradigm for an Affordable CAR T Cell Production at Academic Institutions; Molecular Therapy; Methods & Clinical Development. (https://www.cell.com/molecular-therapy-family/methods/fulltext/S2329-0501(18)30122-0)

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

Spiral System.jpg

捲式膜運作基礎

將平板膜,加襯一層進料墊片,以捲式方式呈現一柱狀體,過濾方式同樣是採用切向流 (TFF)。

擬濃縮樣品穿過流動通道,以切向流方式運行。濾液則穿過膜表面進入滲透物間隔區,並向下流向滲透物管內,大分子樣品則達到濃縮目的。

由於其結構簡單,可以膜材料的種雷多,且可很容易地產生不同長度與直徑。

Spiral Membrane.jpg

 

優點

  • 膜的選擇性更多 : 奈米濾 (from 100 ~ 800 Da) ; 超濾 ( 1 ~ 800 kD) 以及 微濾 (800 kD~0.2u)
  • 分子量最小可達 100Da 以下
  • 有抗有機的PVDF膜材可使用, 用途更為廣泛
  • 結構簡單, 價格優

 

奈米膜.jpg

超濾膜.jpg

微濾膜.jpg

 

搭配高壓膜片式幫浦

由於構造的關係, 捲式膜可承受極高的壓力, 建議採用高壓幫浦使用

如桌上型, 可採用 ADP-H 膜片式幫浦

Maxi Pressure = 100 psi; Maxi Flow Rate = 5L

diaphgram pump.jpg

 

但此系統的為其唯一的侷限........樣品要求最低處理體積較大....

若需處理較大樣品體積, 此款膜為另一種優質高效率的選擇

 

有需任何進一步資訊, 請洽

欣梗科技股份有限公司   02-28726874

logo.jpg

 

 

 

 

 

 

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

Hollow Fiber.jpg

  Hollow Fiber

  • 特殊的切向流,換液濃縮效率高。
  • 分子量可選擇性多且廣 (1kD; 3kD; 5kD; 10kD; 10kD; 30kD; 50kD; 70kD; 100kD; 300kD; 500kD以及750kD等等)
  • 回收率高,達95%以上。
  • 可重複使用
  • 換液濃縮效率上是「離心管式」所無法相比擬的。

切向流.jpg

 但需配合特殊幫浦與最低處理量的要求,阻礙了樣品體積低於10cc以下的應用。

 

 專利創新的微量型新設計

  手動組.jpg

  • 創新的微量型新設計,讓微量的樣品也可利用Hollow Fiber進行換液與濃縮。
  • 最終體積可達0.5cc以下。
  • 操作簡單,2分鐘內完成安裝設定。
  • 設定好基座後,放置於4℃冰箱內,讓其自動濃縮即可。
  • 清洗後,可重複使用。

手動濃縮步驟.jpg

 

  應用範圍

  • 換液與濃縮。
  • 病毒、蛋白質、奈米、細胞、高分子聚合物等等。

 

  免費提供更詳細與完整的方法資訊,請洽:

  欣梗科技股份有限公司 02-28726874 ; info@lefoscience.com

 

 

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

Ultra Yield Flask.jpg

選對培養工具

耗氧菌的E. C oli,隨著細胞增生與密度增加,對氧氣需求也逐漸的拉高。因此於培養過程中,如何提升溶氧效率為重要因子之一。

Thomson 的培養瓶(Ultra Yield Flask)的設計概念,即考量如何讓菌能長的好、長的多。長的好則需提升氧氣溶解率,因此設計培養瓶底部含六組檔板,強化液體擾流,進而大幅增加培養基與氧氣接觸表面積,以提高溶氧效率。另將瓶身做廣,做寬,用以提高培養體積。當培養體積增大,總細胞數相對增加,此時所需氧氣將會更多。因此將瓶口做大,並配合特殊的換氣膜,使培養瓶擁有更多的氣體交換率。

Incubation Conditions.jpg

 

選對接種時間

利用製做一份生長曲線,了解微生物最適生長時期(對數期)的時間,並於該時期進行轉殖培養

growth curve.jpg

 

選對表現條件

@ OD 600nm = 4時,此時約為微生物對數生長期的起始期,可開始進行佳誘導。並將培養溫度調降至18 ~ 25°C,震盪速度也調降至250 rpm 以下。約24小時後,即可收樣,然後您會發現結果確實與之前不一樣了。


免費提供更詳細與完整的方法資訊,請洽:

欣梗科技股份有限公司 02-28726874 ; info@lefoscience.com

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

病毒濃縮方法, 有採用傳統透析膜 (Dialysis Mambrane)方式, 最常用的則採用 離心管 (Spin Column). 而最近比較熱門與快速的則是採用 中空纖維膜 (Hollow Fiber) 處理.

MAP.jpg

茲就其分離原理, 操作方式以及效率, 整理出一張表如下 :
 

傳統透析

 

dialysis.jpg

離心分離

 

spin column.jpg

中空纖維膜處理

MAP.jpg

原理與方法

濃度差,產生自然對流滲透

透析原理.jpg

利用透析膜內外之濃度差,以自然對流與滲透方式分離,於過程中外部之緩衝液需經常更換,以維持膜內外知濃度差異。

 

 

 

以離心力,樣品經分子篩,以Dead End方式分離

Dead End.jpg

起初樣品能順暢的經過分子篩分離出大小分子。但隨著大分子漸漸聚集,將分子篩塞住,小分子也就愈難能被分離出。

 

 

 

同樣是利用分子篩分離,但採Cross Flow式分離

Cross Flow.jpg

樣品(大小分子)持續於中空纖維膜內流動,過程中小分子會順式經由分子篩流出,而其餘尚未被分離的大小分子仍會持續不停得流動,直至分離完成。

處理時間

慢且耗時

通常需耗時二天二夜才能完成分離與換液。

稍快

 

但濃度越高離心時間越長

 

操作手續

程中需不斷的更換緩衝液,以維持一定的濃度差與透析效率。 無法執行連續式,每離心完一次,需添加新的緩衝液,再離心處理,反覆此過程。

可執行連續式換液與濃縮

 

回收率

無法濃縮樣品,甚至透析過程中常是被稀釋 樣品易因膜的關係沾黏,而大幅降低回收率 Recovery Rate > 98.5%

最低濃縮體積

樣品無法濃縮 無法預估與掌控 可設定最後濃縮體積,最小可達<0.5ml

無菌處理

不容易 不容易 可將相關管件先以 Auotclave 處理,全程於無菌操作台內進行換液與濃縮。全程無菌處理

放大處理

無法處理較大量體積 較大體積需分管處理。若更大體積將無法處理 處理體積可由 1 ml ~ 數千公升均可

Note : Hollow Fiber 可選擇的 MWCO 相當密集且廣泛: 1; 3; 5; 10; 30; 50; 70; 100; 500; 750 kD; 0.1; 0.2; 0.65 u 等等

 

相關更進一步訊息, 請洽 欣梗科技 TEL: 02-28726874

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

Hollow Fiber.jpg

氧化鐵奈米粒子在奈米材料中廣為人知,其中四氧化三鐵(Fe3O4)為已知的生物相容材料,使用在生醫方面快40年了,也被允許用在人體方面。四氧化三鐵磁性奈米粒子有可溶水和可進入細微組織的特性,其常見的製作方法主要為共沉澱法(水相)和熱分解法(有機相)。在生物醫學應用的必要條件必須有(1)無生物毒性、(2)水溶性、(3)生物相容性等等,才可符合生醫應用。

四氧化三鐵奈米粒子的生醫應用多元化,最特別的就是與本身磁性性質有關的溫熱治療和藥物磁性導引治療。例如有一隻老鼠背部有一顆腫瘤,我們將磁性奈米粒子從尾巴注射進去,並在腫瘤位置周遭放置磁鐵,即可達成藥物導引於腫瘤處治療,而磁性奈米粒子在外加磁場狀態下,會吸收交流磁場能量,使其在原地旋轉產生熱,進而讓周遭的水溶液溫度上升。由於人體正常細胞跟癌細胞對溫度的承受度不一樣,人體正常細胞耐熱度為攝氏43 ~ 45度之間,而癌細胞耐熱度大概是攝氏42度。熱治療的概念,就是把溫度提高到癌細胞無法承受的溫度,而人體正常細胞還可以忍受,此時癌細胞就會開始死掉,當維持此溫度一段時間,癌細胞就有機會死光,達到治療的目的。(Source : 鄭豐裕 | 成功大學口腔醫學研究所助理教授 https://scitechvista.nat.gov.tw/c/sBXU.htm )

 

  傳統方式 : 

製備多以沉澱法製作,製備完成後之樣品處於極酸溶液,需採用透析法將pH值調節至貼近中性。至少需 2天2夜進行透析耗時且癈事

dialysis.jpg

 

  最新方法 : 

原液.jpg

50 分鐘後, 即可達 10x 透析,完成離子分離換液完成

process.jpg

 

更多資訊,歡迎聯絡我們欣梗科技!!

TEL: 02-28726874

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

解析INFORS 震盪培養箱七大特殊設計徹底改變了培養箱,不再是「占空間」、「小容量」與「噪音製造機」。另一重點是…..價格很親民

震盪培養箱.jpg

  1. 獨特的可程式溫度控制;可設定自動低溫誘導;應用於蛋白質表現後之自動低溫保存;或可設定延遲起動時間

可程式溫度控制.jpg

  2. 小體積大容量設計

容量比較.jpg 

  3. 容量一樣大,但最高操作的高度卻僅為 130 cm;操作不礙手

設備高度.jpg

  4. 最大轉速可達 400 rpm;振幅軸距有 25 與 50 mm二種,適合各種不同培養用途

培養.jpg

  5. 外拉式震盪盤,採用可水洗式甩尾王黏貼板。可輕易置放不同培養瓶與培養架

甩尾王黏貼板.jpg

  6. 懸吊式設計;於高震盪轉速下可自動維持設備的平衡;讓設備更加的安靜

震盪懸吊系統.jpg

  7. 一體成形底部, 當培養液不慎外漏時, 拆卸保養清理容易,且可以直接以清水清洗內部

可水洗.jpg

 

 隨時歡迎洽詢....親民的價格

欣梗科技股份有限公司 (www.lefoscience.com)

TEL: 02-28726874

e-mail : info@lefoscience.com

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

濃縮與過濾,二步驟……輕鬆放大製程

濃縮透析二步驟.jpg

 

古早的過濾與濃縮

紅龜粿.jpg

古早就有以膜方式進行濃縮的概念。如台灣有名的傳統小吃「紅龜粿」與常見的伴手禮「麻糬」,以前製作方式為利用麻袋(膜),以除去糯米水中的水分。至於製作量的多寡與所需時間長短的拿捏,則僅憑藉著師父個人經驗進行拿捏與判斷。

因應現代產品種類複雜與多樣化

常有客戶來電問「能處一噸的濃縮設備,需多少費用……..」。回答這個問題,事實上非常困難,因為現代產程所需處理的樣品種比傳統複雜、且多樣。產品特性因濃度、黏稠度的高低,都影響著過濾速度與所需花費的時間。較大系統式當然可應付,但需多大才足以應付產程所需呢?

另,也常有客戶會說「濃縮時間長短沒關係…..」。此問題也難以回答,因為中空纖維膜是沒有阻塞的問題,但膜面積卻與過濾效率息息相關。時間一拉長,如處理過程超過四~五小時以上,則產品很容易變質、變性。而多大的系統才能於五小時內完成呢?

可經由科學化二步驟,來評估系統之大小

步驟一: Pore Size與產品穩定度的評估

產品於進行量產前,建議可先取 50~500 ml樣品先進行小量的測試。利用 MicroKros Midikros Hollow Fiber Module,配合 MAP System進行不同Pore Size的效率評估測試。同時檢視樣品於經中空纖維膜處理一段時間後,產品有否因而產生變異。

Microkros %26; Midikros.jpg  MAP system.jpg

步驟二:量測Flux Rate與最佳之TMP

當通過步驟一的Pore Size與樣品穩定度測試後,可再利用MiniKros Sampler Hollow Fiber Module進行樣品1~3公升的先導型小量產測試。同時配合 "KR2i TFF System",讓電腦自動演算出該Pore SizeFlux Rate與最佳之TMP條件。

KR2i.jpg

進行量產系統評估

確定好膜的Pore Size,同時有獲得該Pore SizeFlux RateTMP相關條件與數據。此時使用者或業者僅需提供「未來產程所需的處理量」與「擬設定處理時間」,即可利用以上數據來進行合理化的線性放大評估。

優點

獲得高效益,降低成本

沒經過比較縝密的評估,而選用較大系統是可縮短處理時間,但過大的系統將使投資設備成本增加,未來更換所需耗材費用也較高。                                 

提升產品品質,減少時間衝擊

Pore Size的選擇於濃縮分離上是一重要議題。過小Pore Size可提升樣品回收率,但處理時間相對的過長,品質不易掌控。而較大的Pore Size是可縮短處理時間,但是會導致產品回收率降低。

 

For More Information ......

欣梗科技股份有限公司 (www.lefoscience.com)

02-28726874

info@lefoscience.com

 

 

 

 

 

 

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

能讓細胞快樂生長的 Spinner Flask

 

規格

  • PTFE Cap with Silicon Sealed
  • Adjustable height stirring rod
  • The tod does not go beyond the cap : more space in incubator
  • The kit includes a glass flask, a rod with a glass, PTFE palette and a PTFE cap
  • Vessel is made by borosilicate glass

Spinner Flask.jpg

 

Double Arm Spinner Flask

  Order Number

Working Volume

Top Cap

Arm Caps

OD x H (mm)

SF-025

25

38  

GL-18

38 x 122

SF-050

50

38

GL-18

55 x 141

SF-125

125

70 

GL-32

70 x 135

SF-250

250

70 

GL-32

85 x 145

SF-500

500

70

GL-45

110 x 90


   欣梗科技股份有限公司 (www.lefoscience.com)

              02-28726874

              info@lefoscience.com

文章標籤

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

試試新一代的福瑪斯達 D2瑞士環安等級殺菌消毒劑

Fermacidal D2.jpg

 

 一般最範用與耳熟能詳的殺菌劑是 --- 酒精, 只有 75% 酒精具有殺菌功效的原理:

酒精濃度愈高與其殺菌效果並不是成正比。原因是高濃度的酒精,會讓細菌的外殼瞬間凝固,使表面蛋白變性,但酒精也因此沒辦法繼續深入細菌內部了,完全不具穿透力。換言之,菌體內部仍具有活力,無法完整殺死細菌。

經研究,酒精濃度只有於75%下是最適當,於此濃度下,不但可引起蛋白質變性,並具有穿透性特性,深入細菌內部,讓細胞脫水,凝固蛋白質,達到殺菌的效果。

 

   但酒精殺菌的缺點不得不知:  

  •     75%酒精對於腸病毒、諾羅病毒,並無效用。因為這些病毒沒有脂質外殼,或是外殼比較厚,酒精也就無能為力了。
  •     刺鼻,刺激皮膚
  •     有時會傷害設備材質,如金屬、塑料、橡膠與壓克力等等。
  •     於密閉空間噴灑,容易閃燃,密閉操作,極具危險性。

 

good.png試試「福瑪斯達 D2」瑞士環安等級殺菌消毒劑的效用

  • 無臭,不刺鼻,不刺激皮膚。
  • 不染色,不會破壞材質
  • 可輕易溶解血跡
  • 清潔與殺菌任何表面,完全不會傷害設備材質。
  • 可中細菌所引起的異味
  • 無閃燃問題

 

殺菌功效

  • 對細菌與真菌非常有效。
  • 有效對抗Hepatitis B, HIV, Mycobacterium (TB), Rotavirus and Influenza A virus ( H5N1 / H1N1 )

 

效能與時間

Efficacy 

Conc. (2% ready-to-use solution)

Time of reaction

Bactericide, fungicide (Candida) according to DGHM

100%

15 mins

Mycobacterium

100%

5 mins

Hepatitis B, HIV

100%

1 min

Rotavirus

100%

1 min

 

適用

  • 手部清潔,不刺激皮膚。
  • INFORS Sticky Stuff (可水洗式黏貼板)
  • 培養箱與其他設備的清理消毒
  • 實驗桌、操作台等清理消毒
  • 解剖台與相關器械清理消毒
  • 無菌操作台清理消毒
  • 無菌室清理消毒

hand.jpg  surgical.jpg   

sticky stuff.jpg   

Incubator.jpg        laminar flow.jpg   

       laboratory.jpg     clean room.jpg

 

更多資訊,歡迎聯絡我們

欣梗科技股份有限公司 TEL: 02-28726874

 

 

欣梗生技俱樂部 發表在 痞客邦 留言(0) 人氣()

1 23