Hollow Fiber-1.jpg

隨著Exosome (外泌體)的研究日趨熱門,如何獲得高純度的Exosome(外泌體),對後續的研究至為重要。當前所採用的方法有超高速離心、密度梯度離心、免疫磁珠、沉澱與試劑盒等。然而以上方法皆有其相當的缺點。

MDPICells刊載了一篇採用中空纖維膜分離純化Exosomes與以離心方式處理,進行了比較:

 

樣本個別以不同分離純化方式處理後,進行檢測。所得的幾項分析檢測數據顯示,以中空纖維膜處理Exosomes明顯是優於離心 :

  • 以每10^6 細胞為單位,採用中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理,比離心式處理,多了將近 2 個對數 (Figure 1,中空纖維膜其回收率可達 10^10,而離心方式,則為 10^8)
  • 另以 100 ml培養基為單位,中空纖維膜處理能獲得的產量大約是離心的 5 (Figure 1)

Fig-1.jpg Figure 1

  • Albumin的移除乾淨程度,以中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 處理的效率是離心方式的 40 (Figure 2)

Fig-2.jpg  Figure 2

  • 再現性測試,中空纖維膜 ( Hollow Fiber ) 經過三重複測試,其所得的大小分佈結果,大致都能一致 (Figure 3)。且經電顯檢驗,以中空纖維處理後的樣本(Figure 4)相比,離心後的樣本所能觀察得到的少很多。

Fig-3.jpg Figure 3

Fig-4.jpg Figure 4

 

以上所用的相關實驗器材 :

  1. 採用SpectrumLabsHollow Fiber,以D02-E65U-07-S去除細胞與破裂片的澄清步驟,再以D02-E500-05-S進行透析濃縮純化。
  2. 使用設備為KrosFlo Research 2i Tangential Flow Filtration System
  3. 處理方法:樣品為 0.2L 的細胞液。第一步,先將樣本濃縮至 50ml。第二步,再以5倍的 Sucrose Buffer進行置換液體 (Buffer Exchange)。最後再濃縮至 6~9 ml

 

綜合討論 :

由以上實驗分析後可得知,中空纖維膜 ( Hollow Fiber ),可將生物檢體,於非常緩和與穩定的條件下,進行快速分離純化出微量的 Exosomes。其再現性極佳,且可將過程線性放大至更大的體積量。

MAP.03-TFF.jpg

以上資料參考來源 :

Busatto, S. et al., 2018. Tangential flow filtration for highly efficient concentration of extracellular vesicles from large volumes of fluid.

 

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