一次讓您了解透析(Dialysis)常見的問題 @ 欣梗生技俱樂部

透析膜種類與價格？

Answer : 透析膜種類繁多，建議可參閱 透析膜選項，或直接來電洽詢 (02-28321066)。

透析膜使用前的前處理方法?

Answer : 透析膜種類有 RC與 CE膜，方法大致都是先以去離子以上等級的水浸泡 30 分鐘以上，同樣再以去離子以上等級的水沖洗，即可開始使用。另針對微量金屬與硫化物敏感的樣品，則可選擇用已預處理移除微量金屬與硫化物的 Sprctra/Por 7 RC，或是採用 Repligen的特殊清洗劑，以完全移除微量金屬與硫化物。

透析是如何運作的呢? 大概多久可以完成呢?

Answer : 透析乃利用膜濃度差，溶質從高濃度(樣品)擴散穿過透析膜至低濃度的區域(透析溶劑)，直到達到濃度的平衡。小溶質穿過膜時，較大的溶質會被阻擋在透析袋內。將透析袋與緩衝液置放於磁力攪拌器上攪拌，每天至少更換四次緩衝液，透析的標準流程大約是16到48小時。

Dialysis with Stirrer.jpg

透析液體積與樣品的比例要多少?

Answer : 大體積的透析液對小分子擴散有較佳的驅動力,我們一般建議緩衝液與樣品的體積比為100:1.

膜孔徑的準確性如何？該如何選擇正確的MWCO透析膜?

Answer : 首先Molecular weight cut-off(MWCO)截流分子量，定義為樣品經過17小時的透析後，能保留90%以上之該樣品的分子量大小，用來當作透析膜孔徑單位，因此所選擇的透析膜孔徑大小應要小於我們所要保留的樣品分子量大小；建議透析膜的MWCO為所要保留的樣品之最大分子量至少小3倍左右，也就是假設最大保留樣品的分子量大小為60 KDa，則可選擇20 KDa以下的膜；而所要保留的溶質與所要分離的物質之間的分子量差距至少要5倍才能達到較有效的分離，否則只能採取其他相關的分離技術如層析或TFF過濾法會較有效果。

哪一種透析膜比較能避免膜與蛋白質結合?

Answer : 每種類型的膜對各種分子表現出不同的親和力。對於球狀蛋白，相對結合親和力是CE <RC，也就是說以CE膜來透析的話較不會吸附球狀蛋白，能達到較高的回收率。

該如何選擇適當的透析夾?

Answer: 首先本公司有SPECTRA/POR(Standard)及UNIVERSAL兩種透析夾(參考透析夾產品連結)，UNIVERSAL的夾子強度較溫和，SPECTRA/POR的夾子較緊。Standard RC membrane (Spectra/Por^® 1-7)和Biotech RC是由柔性再生纖維素聚合物所組成，可以適用於任一種透析夾。而Biotech CE是由較堅硬的聚合物所組成，所以需要使用較溫和的UNIVERSAL透析夾。因此若對透析夾的選擇有疑慮，可一致都使用UNIVERSAL透析夾。而透析夾長度應大於透析膜封口寬度約4-10mm。

透析膜的效期是多久呢?

Answer : 乾燥包裝的透析膜的效期為5年。濕包裝（0.05% sodium azide solution）膜的效期為3年。

如果膜變乾或凍結，還能使用嗎？

Answer : 如果是濕膜變乾了，會對孔徑造成不良的影響，且膜會變脆並可能洩漏，應丟棄。如果膜凍結，冰晶可能會使膜破裂並引起洩漏。但是，您可以嘗試緩慢升高溫度，直到儲存溶液完全融化，但膜可能會不完整。

透析膜不含內毒素嗎?

Answer : Repligen 所供應之透析膜不含內毒素，僅供實驗用途使用。

若是膜上有摺痕、滾痕或折線，還能正常使用嗎?

Answer : 薄膜上的滾痕或折疊線是不會影響擴散與透析效率的。

為什麼CE膜比RC膜更堅硬和更不透明?

Answer : 由於纖維素酯化物膜(CE)中的聚合物cross-link形成更堅硬的分子晶格，而再生的纖維素膜（RC）的聚合物則形成較軟的晶格結構。而不透明是與CE膜的孔徑大小有關，孔徑越大，膜越不透明。

透析膜可以用化學的方式或加熱來密封嗎?

Answer : CE和RC透析膜只能用機械式密封。

處理相同的蛋白質樣品時，Spectra/Por 透析膜可以重複使用嗎?

Answer : 我們不建議重複使用透析膜，因為它們可能會因處理和透析條件（pH，溫度，化學暴露等）而受到污染，並且會改變膜的完整性或引起滲漏，尤其是在拆除和重新封裝時。

關於膜表面積與樣品量是否有“經驗法則”？

Answer : 準則是膜的表面積 / 體積之比越大，則透析越快，因此若有兩個等長的透析膜，但寬度不同，則較小寬度的透析膜具其表面積/體積比大，因此透析速度快。相對的，較大寬度的透析膜其表面積/體積之比較低，因此透析速度較慢。

透析高鹽濃度樣品時的最佳方法是什麼？

Answer : 高滲透壓效應下容易使膜破裂，因此建議採用漸進式的透析方式，以濃度差為10:1方式更換緩衝液。如欲透析含有5 M NaCl的樣品，就可先以含有500 mM NaCl的緩衝液來進行透析。

透析膜如果用於超濾，可以承受多少壓力？

Answer : 透析膜不適用於壓力過濾，其最大承受壓力為1.5 psi。

透析時通常會使用哪些透析液（緩衝液）？

Answer : 一般於生物化學當作緩衝液，如：水 / PBS (Phosphate buffer saline) / TBS (Tris buffered saline) / HEPES / Amino Acid Buffers

可以使用打結的方法來取代透析夾嗎?

Answer : 強烈建議不要在管子上打結。打結不能有效地防止洩漏。只有透析夾才能為樣品的安全透析提供足夠的密封。

請問我該如何裁切適當的透析膜長度?

Answer : 參考Spectrum(Repligen)表單中所列出的透析膜管體積/長度比來計算我們所需的透析膜長度。例如：16 mm寬度的膜，體積/長度比為0.79 ml/cm，要能容納5 ml的樣品，我們會需要約6.5 cm長度的透析膜。
然而我們需要預留約10-20 %(至少1 cm) 的長度讓袋口上端留有空氣以增加浮力以及讓透析過程中水分子滲透入膜內而有微膨脹的空間，此外還要再預留頭尾兩端約2公分的長度來置放透析夾．所以總透析膜長約為11.5 cm。