講求透析高回收率時,常常被忽略掉因素與方法

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透析膜一是種半透膜,高濃度的小分子經由半透膜,往低濃度擴散,直至二端濃度達至平衡。進而再次更換新的外部透析液,繼續進行透析。持續幾次此步驟,即可將樣品小分子全數被透析出。因此透析膜的材質透析膜孔徑的精細度影響透析效率甚巨。

CE (Cellulose Ester)

蛋白質對於膜的Binding程度為 CE < RC。而膜孔徑的專一性則為 CE > RC

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透析膜一般最廣為人知的材質是RC (Regenerated Cellulose),傳統的分子量(MWCO)可選擇範圍是 3.56~8 12~14kD (詳細規格可參閱      "欣梗-RC膜" "SpectrumLabs-RC" )

隨著材料科技發展,SpectrumLabs研發出讓 RC 膜的分子量(MWCO)可選擇性更多樣化,由1 kD, 2 kD, 3.5 kD, 8 kD, 10 kD, 15 kD, 25 kD 50 kD,讓透析變得細緻化,而不是一般所認知的大約大約…. ( 詳細規格可參閱    "欣梗-RC-S" "SpectrumLabs-RC-S" )

但這些發展似乎仍無法滿足生物科技的高回收率之要求,其最重要關鍵因素在於蛋白質本身與膜的Binding的因子與分子量 (MWCO) 的專一度。CE膜對蛋白質幾乎無Binding的問題,且分子量 (MWCO) 專一度極佳。因此唯有此款 CE材質才能因應高回收率與高精緻度的要求,其分子量的選擇範圍則更為寬廣,由100-500D, 500-1000D, 3.5-5 kD, 8-10 kD, 20 kD, 50 kD, 100 kD, 300 kD 1000 kD (詳細規格可參閱   "欣梗-CE""SpectrumLabs-CE" )

因此一般泛用型可選擇 RC 膜,但對於回收率有極高要求的樣品,如非常珍貴或進行藥物釋放實驗,則建議可選用 CE 膜。

 

Micro Float-A-Lyzer (超微量型透析管 for < 1ml)

Micro Float-A-Lyzer-01.jpg 詳細規格可參閱  "欣梗-FAL" or "SpectrumLabs-FAL"

操作與處理非常微量樣品,是最不容易且非常費事的事。SpectrumLabs因應此一問題,提供二款特殊設計透析膜,其容量分別是100-200 µl 400-500 µl。由於樣品體積量少,因此回收率則變得極為重要。此款透析膜採用CE膜,外加其特殊扁瓶設計,讓樣品與透析液接觸面積增加,強化透析效率。亦因此特殊設計,可輕易的將樣品利用所附的小取樣器,完完全全被取出,無任何殘留。

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此款其分子量的選擇範圍為100-500D, 500-1000D, 3.5-5 kD, 8-10 kD, 20 kD, 50 kD100 kD

 

Float-A-Lyzer G2 (便利型透析管for 1~10 ml)

Float-A-Lyzer G2-02.jpg 詳細規格可參閱  "欣梗-G2" or "SpectrumLabs-G2"

透析袋式透析膜,有幾項操作不便之處:

  1. 需使雙夾具,而夾具的位置/方式不適當,樣品極易因此於透析過程中滲漏。因此操作上須非常謹慎。
  2. 謹慎夾妥後之透析袋置於透析槽中,常常是載浮載沉,不易固定,影響透析效率。
  3. 另一比較大問題是無法於中途採樣。
  4. 透析帶為軟性材質,於透析過程中,樣品容易被稀釋。

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SpectrumLabs 因此法展出一款便利型透析管,完全無需錢處理與夾具,只要以pipette將樣品置入於管中,蓋上螺紋蓋,即可放入透析槽內。該透析管設計有一浮板,可將透析管垂直式漂浮於透析槽中。且透析管為圓型管柱,稀釋得問題得以被降低。而於過程中,隨時可輕易開啟螺紋上蓋,進行取樣檢測。

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此款透析管有 1ml5ml10ml三種體積,其分子量的選擇範圍為100-500D, 500-1000D, 3.5-5 kD, 8-10 kD, 20 kD, 50 kD100 kD

 

Tube-A-Lyzer (管中管式透析管for >10 ml)

Tube-A-Lyzer-01.jpg 詳細規格可參閱   "欣梗-TAL" or "SpectrumLabs-TAL"

此款透析管有著Float-A-Lyzer G2 (便利型透析管)的所有優點。因為此款透析管微處理較大體積,採用管中管設計。內管為樣品管,而外管則讓透析液流動,讓樣品能持續接觸到新的透析液,增加透析效率,免除於透析時需定時更換新透析液的麻煩。

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此款透析管有 10ml30ml二種體積,其分子量的選擇範圍為100-500D, 500-1000D, 3.5-5 kD, 8-10 kD, 20 kD, 50 kD100 kD。若處理體積大於10ml30ml時,可採取併聯或串連式銜接,增加處理體積。

 

其他注意事項

一般透析約16~24小時可完成,但與膜孔徑(MWCO)的選擇,樣品體積,小分子濃度,外部透析液所使用的體積,外部透析液更換頻率與透析液攪拌等等,均可影響到透析時間與效率。

使用者最常讓忽略掉的是透析液的體積與換液頻率此部分因素。外部透析液體積與樣品體積差異愈大,其透析效率則愈高。一般建議比例為 100 1。換液頻率至少三次以上,於 2~3 小時後,進行第一次換液。之後4~5小時後進行第二次。最後為離開實驗室前進行第三次,讓其透析一個晚上。

以上訊息均可大大提高樣品透析效率與透析後的精緻度,並將低處理時間。

 

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 欣梗科技股份有限公司

      www.lefoscience.com

      TEL: 02-28726874 

      e-mail: info@lefoscience.com

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

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